核糖体失活蛋白(Ribosome Inactivating Protein，简称RIPs)是一类rRNAN-糖苷酶(EC 3.2．2.22)，可专一水解大鼠28S rRNA的A4324位的N—C糖苷键，使核糖体失活从而抑制蛋白质的合成。根据RIPs一级结构的特征，可将其分成三类。其中I型RIPs最主要的一个生理生化特征就是对无细胞体系的蛋白质合成具有强烈抑制作用，该类蛋白生化性质稳定，制备简便，可与单克隆抗体等制备免疫毒素，在肿瘤治疗和骨髓移植等方面具有广泛应运前景。本实验室从四川麻疯树种仁中分离纯化得到一种I型RIPs(curcin)。目前对curcin的基因克隆及序列分析已经作了大量工作，但对curcin的高级结构还知之甚少。因此本文在前人研究的基础上利用特异性的化学修饰剂对curcin五种氨基酸进行化学修饰，以其得到与curcin核糖体失活活性相关的结构信息。 麻疯树核糖体失活蛋白(curcin)经匀浆、浸取、硫酸铵分级沉淀得粗品，将粗品于Scphadex G-100分子筛层析得纯品，经SDS-PAGE检测为单一蛋白带。通过无细胞体系蛋白合成抑制活性的测定，结合荧光光谱和圆二色谱技术，对麻疯树核糖体失活蛋白(CUFCin)部分氨基酸残基进行特异性化学修饰，探讨维持curcin活性的必需氨基酸基团及修饰对curcin结构的影响。结果表明，组氨酸和半胱氨酸的化学修饰对curcin活性没有影响。色氨酸和赖氨酸的修饰结果表明对这两种氨基酸的修饰表现了剩余活性对修饰剂浓度和修饰时间的依赖性，随着修饰时间的延长和修饰剂浓度的增大，curcin失活程度增大。最终活性分别下降了50％和100％，表明其为维持curcin活性的重要残基。280 nm处的发射光谱最大发射波长发生红移，表明对这两种残基的修饰影响了色氨酸的微环境。精氨酸修饰也表现出了对修饰时间和修饰剂浓度的依赖性，最终curcin的抑制活性完全丧失，内源荧光强度下降，最大发射波长发生红移，CD谱发生显著变化。表明精氨酸是维持clarcin活性的必需残基，并且对空间结构影响较大，推测对精氨酸的修饰破坏了其与其它基团的连接，导致curcin分子结构发生改变，失去和底物结合的能力，因而活性丧失。荧光淬灭研究表明丙烯酰胺和碘乙酸分别能淬灭curcin中色氨酸残基98％和85％的荧光，而Ⅺ几乎不能淬灭curcin的荧光，表明几乎所有的色氨酸位于curcin近分子表面相对疏水的浅沟或强阴离子区域。