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孔雀石绿、灿烂绿和结晶紫为三苯甲烷类染料，具有潜在的致突变性和致畸性危害，但因其有较强的抑菌作用而时常被养殖用户等非法用于水产品养殖、储运中。西地那非是一种治疗勃起功能障碍的处方药，常非法添加至保健食品中，食用后可引起血压大幅降低甚至死亡的危害。因此，加强监测这些药物违禁或非法添加至相关食品中对食品安全的控制至关重要。目前，免疫分析方法具有灵敏度高、操作简单、快速、成本低等优点，而作为现行仪器确证技术方法的有益补充，常用于食品中小分子有害物质的检测分析，但目前还未见成熟的三苯甲烷类药物和西地那非药物检测试剂盒报道。因此，本论文以三苯甲烷类药物和西地那非药物为研究对象，研究建立其酶联免疫试剂盒，并对其性能指标进行了评价。主要研究结果如下： (1)三苯甲烷类染料多残留ELISA检测试剂盒研制 利用前期制备出针对三苯甲烷类染料的2种抗体和4种包被原进行组合筛选，筛选出的组合对灿烂绿、孔雀石绿和结晶紫都显示出很高的交叉反应率。优化三苯甲烷类icELISA反应条件后，建立的icELISA方法检测灿烂绿、孔雀石绿和结晶紫的IC50分别为1.98、1.61和1.34 ng/mL，相应的交叉反应率为100％、105.1％和142.3％。 以草鱼和池塘水为检测样品，优化前处理条件。组建三苯甲烷类染料ELISA试剂盒。结果得出：三苯甲烷类抗体与其它结构类似物均无交叉反应；添加单一药物和混合药物到空白样品中，ELISA试剂盒检测各样品添加回收率均在70％-110％，用HPLC方法进行验证，得的相关系数R2都大于0.9224；当该ELISA试剂盒检测三苯甲烷类染料浓度高于1 ng/mL时，板间和板内的变异系数都小于15％；组建的试剂盒在4℃保存3个月不引起灵敏度的变化。 (2)西地那非单残留ELISA检测试剂盒研制 利用前期制备出针对西地那非的2种抗体和2种包被原进行组合筛选，最终选择PcAb-SDEA-BSA抗体和SDBA-OVA包被原。经优化后，建立了西地那非icELISA方法。该方法测定西地那非的IC50为0.156 ng/mL，检测限IC10为0.0054 ng/mL，检测线性范围IC20-IC80为0.02-3.82 ng/mL。 在西地那非样品前处理方法中，比较了固相萃取法和直接提取净化法的优缺点。组建西地那非ELISA试剂盒。结果得出：抗体与瓦地那非有75.22％的交叉反应率，与其它2种结构类物没有明显的交叉反应率；以补肾片、补肾糖浆和海狗油为检测样品，用HPLC-MS/MS方法和icELISA试剂盒测定添加回收率，两种方法测得不同样品中西地那非回收率都在80％-120％之间，两种方法的相关系数R2为0.9359；批内变异系数和批间变异系数都小于20％；试剂盒可在4℃保存至少6个月。