中药茜草乙酸乙酯萃取组分的分离与鉴定及其生物活性研究

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中药茜草为茜草科植物茜草(Rubia cordifolia L.)及同属近缘植物的干燥根及茎,是我国传统常用中药之一,在我国有着广阔的资源分布。除已报道的生物活性外,近年来研究发现茜草具有抗银屑病(抑制人体表皮细胞异常增殖)、抗肿瘤以及抗氧化等生物活性,引起了研究人员的广泛关注。目前茜草生物活性的研究大多集中在醇或水的粗提物上,有关茜草乙酸乙酯萃取物的生物活性研究很少见报道。本课题前期研究表明,茜草乙酸乙酯萃取物的抗银屑病活性和抗氧化活性最为明显,但乙酸乙酯萃取组分的分离、鉴定及生物活性未见报道。本论文以中药茜草乙酸乙酯萃取组分为研究对象,通过生物活性追踪法,对其进行进一步的分离及纯化,得到了不同的分离组分210个和单体化合物12个;通过波谱学技术对单体进行结构鉴定和解析;测定了各级组分和单体的抗银屑病活性及抗氧化活性,为探索中药茜草的药用机理及新的临床应用奠定基础。具体研究工作如下:1.运用吸附柱色谱、薄层色谱、过滤、重结晶等分离技术和手段,对中药茜草乙酸乙酯萃取物进行分离和纯化,得到不同的分离组分210个及单体化合物12个。通过高效液相色谱(HPLC)、红外光谱(IR)、核磁共振波谱(1H-NMR,13C-NMR)以及质谱(MS)等对单体的纯度和结构进行分析和鉴定,确定化合物7、10、11和12分别为1-羟基-2-甲氧基蒽醌、2-甲基蒽醌、1-羟基-2-甲基蒽醌和1,4-二羟基-2-甲基蒽醌。其他的八个化合物,有待进一步解析。2.采用MTT法对分离得到的各级组分及单体化合物的抑制人体表皮细胞(HaCaT)增殖活性进行了测定。结果表明在二级组分ⅡA~ⅡK中活性成分主要集中在极性较小的ⅡJ和ⅡK组分中。ⅡJ和ⅡK进一步分离得到组分中,ⅡJ2、ⅢKF和IVKFF的抑制HaCaT细胞增殖的活性较高,其IC50值分别为10、14.5和12.5μg/mL。分离得到的单体化合物中10和11对HaCaT细胞增殖抑制活性较高,其IC50值分别为31.91和20.97μg/mL。3.采用铁离子还原(Ferric Reducing Antioxidant Power, FRAP)法、硫代巴比妥酸(2-Thiobarbituric Acid, TBA)法及二苯代苦味酰基自由基(1,1-Dipheny-2-picrylhydrazyl, DPPH·)法测定了分离得到的各级组分和单体化合物的总抗氧化活性、抗脂质过氧化活性及清除自由基活性。实验结果表明:二级组分ⅡA~ⅡK中极性较大组分的抗氧化能力高于极性较小组分,ⅡA的总抗氧化能力最强;组分ⅡA~ⅡH的抗脂质过氧化能力明显高于维生素(Vc),其中ⅡA组分最为明显;在ⅡA分离得到的三级组分ⅢAA~ⅢAJ中,组分ⅢAF的抗氧化能力相对较强;在分离得到的单体化合物中化合物1的总的抗氧化活性最强。
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