【摘 要】
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目的:本研究以香烟烟雾提取物（Cigarette smoke extract,CSE）腹腔注射联合烟熏（Cigarette smoke,CS）建立肺气肿小鼠模型,并检测Micro RNA-23a（mi RNA-23a）的表达水平、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）的浓度以及肺泡隔细胞凋亡的指数,旨在探讨mi RNA-23a在小鼠肺气肿中的作用及其与肺泡隔
【基金项目】
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中国医学科学院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助（2019PT320003）；
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目的:本研究以香烟烟雾提取物（Cigarette smoke extract,CSE）腹腔注射联合烟熏（Cigarette smoke,CS）建立肺气肿小鼠模型,并检测Micro RNA-23a（mi RNA-23a）的表达水平、肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）的浓度以及肺泡隔细胞凋亡的指数,旨在探讨mi RNA-23a在小鼠肺气肿中的作用及其与肺泡隔细胞凋亡、TNF-α之间的关系,为临床上研究肺气肿的发病机制及寻求新的治疗提供理论依据。方法:将23只雄性C57BL/6J小鼠编号,然后按编号随机分为肺气肿4周组、肺气肿8周组、正常对照组;其中肺气肿4周组和8周组每组各8只,正常对照组7只。肺气肿4周组通过（CSE+磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffered Solution,PBS）腹腔注射（第3、14、25天）+CS暴露（4周））,肺气肿8周组通过（CSE+PBS腹腔注射（第3、14、25天）+CS暴露（8周））,正常对照组腹腔注射PBS（第3、14、25天）。烟雾暴露结束24小时候后,采集三组小鼠的血液、肺组织及左肺肺泡灌洗液（Bronchoalveolar Lavage Fluid,BALF）,正常对照组与肺气肿8周组在同一天采集,并及时完成下列检测:（1）通过实时荧光定量法（Quantitative Real-time PCR,q RT-PCR）检测mi RNA-23a在肺组织中的表达水平。（2）观察并计算苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin,HE）染色后的肺组织病理变化并计算肺泡平均内衬间隔（Mean Linear Intercept,MLI）和平均肺泡数（Mean alveolar Numbers,MAN）。（3）用酶联免疫吸附法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA）检测BALF中TNF-α浓度,应用Nexcelom Cellometer细胞计数仪、进行BALF细胞沉渣染色制片并分类（白细胞、中性粒细胞、巨噬细胞等炎症细胞）计数。（4）脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记（Terminal deoxynucleotidyl trans ferasemediated d UTP nick end labeling,TUNEL）法检测肺泡隔细胞凋亡。结果:（1）三组小鼠日常情况比较:正常对照组小鼠活动矫健,饮食基本正常。肺气肿模型组在烟雾暴露后逐渐出现毛发易脱落、呼吸短促、口腔分泌物增多、挠鼻动作增多、反应迟钝。（2）三组小鼠肺组织中mi RNA-23a比较:肺气肿8周组＞肺气肿4周组＞正常对照组,两种模型组与正常对照组之间差异有统计学意义（p＜0.05）。（3）三组小鼠肺组织MLI比较:正常对照组＜肺气肿4周组＜肺气肿8周组,各组之间差异均有统计学意义（p＜0.05）;三组小鼠肺组织MAN比较:正常对照组＞肺气肿4周组＞肺气肿8周组,各组之间差异有统计学意义（p＜0.05）。（4）三组小鼠BALF中白细胞数、中性粒细胞数和巨噬细胞数计数比较,均为肺气肿8周组＞肺气肿4周组＞正常对照组,各组之间差异有统计学意义（p＜0.05）,三组小鼠BALF中TNF-α浓度比较,肺气肿8周组＞肺气肿4周组＞正常对照组,其中两种模型组与正常对照组差异有意义（p＜0.05）;（5）各组肺泡隔细胞凋亡指数比较:肺气肿8周组＞肺气肿4周组＞正常对照组,各组之间差异有统计学意义（p＜0.05）。（6）肺气肿4周组小鼠肺组织mi RNA-23a水平与肺泡隔细胞凋亡指数呈正相关（r=0.806,P＜0.05）,BALF中TNF-α浓度与肺泡隔细胞凋亡指数呈正相关（r=0.73,P＜0.05）,肺组织mi RNA-23a水平与BALF中TNF-α浓度呈正相关（r=0.85,P＜0.05）。（7）肺气肿8周组小鼠肺组织mi RNA-23a水平与肺泡隔细胞凋亡指数呈正相关（r=0.743,P＜0.05）,BALF中TNF-α浓度与肺泡隔细胞凋亡指数呈正相关（r=0.89,P＜0.05）,肺组织mi RNA-23a水平与BALF中TNF-α浓度呈正相关（r=0.74,P＜0.05）。结论:（1）腹腔注射CSE联合烟熏可诱发小鼠肺泡隔细胞凋亡及肺气肿的产生;（2）mi RNA-23a表达和TNF-α浓度、肺泡隔细胞凋亡呈正相关,TNF-α浓度和肺泡隔细胞凋亡呈正相关;推测:mi RNA-23a可能通过调控TNF-α功能诱发肺泡隔细胞凋亡参与肺气肿的形成;（3）随着烟熏时间延长,气道炎症及肺泡隔细胞凋亡可能进一步增加。
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