肾小管间质纤维化（Tubulointerstitial fibrosis，TIF）是各种慢性肾脏疾病进展到终末期肾病的共同通路，肾小管上皮细胞凋亡和表型转化在TIF过程中发挥重要作用。过量服用含马兜铃酸（aristolochic acid，AA）中草药引起的马兜铃酸肾病以肾间质进行性纤维化为特征，最终引起肾功能衰竭。单侧输尿管梗阻(unilateral ureteralobstruction，UUO)模型是目前应用较为广泛的研究肾小管间质进行性纤维化的经典动物模型。近年研究表明，Sonic hedgehog(Shh)信号通路在细胞增殖，促进器官纤维化中起重要作用，但关于Shh与TIF的关系则未见报道。因此，我们通过AA作用肾小管上皮细胞和建立UUO模型来探讨Shh通路在肾间质纤维化过程中的活化情况。　　 目的:　　 1.利用不同浓度AA作用大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E，观察细胞表型活化及ECM情况，探讨AA对肾小管上皮细胞的损伤作用及Shh信号通路在肾小管上皮细胞损伤过程中的作用。　　 2.通过建立UUO动物模型，探讨Shh信号通路在肾间质纤维化过程中的表达变化及可能的作用机制。　　 方法:　　 1.体外实验:①培养大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E。实验分为对照组和AA组。对照组:不加AA; AA组:将1、10和100μg/mlAA加入到细胞培养基中。②细胞培养24、48、72h后，WST-1法检测细胞增殖抑制率;Hoechst33258染色观察胞核形态变化;real-time RT-PCR检测Ptch1、Smo、α-SMA、E-cadherin、TGF-β1和Ⅲ型胶原mRNA表达;Western Blot检测bcl-2、bax、α-SMA和E-cadherin蛋白表达;ELISA检测肾组织中TGF-β1和Shh含量。　　 2.UUO模型实验:①选用48只SD大鼠随机分为UUO组和假手术组，分别于术后第3、7、14天处死取其肾脏组织。②用HE、Masson染色观察UUO大鼠TIF程度。③实时定量-聚合酶链式反应检测Shh信号和纤维化相关分子Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达。④免疫组织化学染色检测Shh信号分子和Ⅲ型胶原的表达。⑤ELISA检测肾组织中TGF-β1和Shh含量，并分析两者相关性。　　 3.统计学分析:采用SPSS13.0软件包进行统计学分析，数据以均数±标准差（(x)±s）表示，组间均数比较采用t检验或单因素方差分析，评价Shh蛋白与TGF-β1含量的关系采用直线相关分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。　　 结果:　　 1.体外实验:予不同浓度AA作用体外培养的大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E，AA明显抑制NRK-52E细胞增殖，并呈浓度依赖性(r=0.817，P=0.047)。1和10μg/mlAA可诱导细胞凋亡，100μg/ml AA则诱导细胞坏死。AA以10μg/ml处理细胞24h后，bcl-2表达下调而bax升高，TGF-β1、α-SMA和Ⅲ型胶原表达增加，而E-cadherin表达下降(P＜0.05)。Shh通路分子Shh、Smo、和Gli mRNA和蛋白表达均明显升高;Ptch mRNA和蛋白表示水平明显下降(P＜0.05)。　　 2.UUO模型实验:UUO组肾组织出现明显的TIF，并且随梗阻时间延长，TIF程度加剧。UUO肾组织TGF-β1、Ⅰ型和Ⅲ型胶原含量较假手术组均明显升高(P＜0.05)。同时，Shh通路分子Shh、Smo和Gli mRNA和蛋白表达均明显升高(P＜0.05)，Ptch mRNA和蛋白表达水平明显下降(P＜0.01)，提示Shh信号通路被激活。相关分析表明，UUO肾组织Shh信号通路起始分子Shh表达水平与TGF-β1含量呈明显相关性。　　 结论:　　 1.AA可明显抑制细胞增殖，高浓度AA作用NRK-52E细胞所致的损伤表现为坏死，而低浓度AA作用则主要表现为细胞凋亡，并证实可通过线粒体凋亡途径发生凋亡。　　 2.低浓度AA损伤肾小管上皮细胞，Shh信号通路被活化，可能诱导细胞表型转分化发生。　　 3.在UUO大鼠TIF过程中，Shh信号通路被显著激活。　　 4.Shh信号通路的激活与TGF-β1表达呈明显相关性，推测在TIF进展过程中两者可能存在串话。　　 5.Shh信号通路可能是未来评价肾间质纤维化进展的指标之一。