我国地缘辽阔,资源种类丰富,拥有天然植物宝库,其中喜树作为一种特殊物种,仅在我国境内生长分布,我国也将其作为第一批重点保护物种进行法律保护。喜树中富含数十种具有独特生物活性的物质,其中以生物碱类尤为重要。人们先后在喜树的果实、树皮中发现了数十种生物碱,其中以喜树碱以及10-羟基喜树碱为代表,喜树碱以及10-羟基喜树碱同样在喜树叶中也有存在。喜树碱以及10-羟基喜树碱常规提取溶剂有甲醇、乙醇、氯仿等溶剂,存在着溶剂用量大、提取成本高、对环境不友好、存在安全隐患等缺点。同时常规提取方法有回流提取法、冷浸法、超声提取法等,存在提取工艺复杂、提取周期长、能源消耗大等缺点。所以寻找一种安全高效、环境友好、操作简便的工艺变得尤为重要。基于上述多种原因,选取资源丰富、可持续再生的喜树叶作为提取原料,以表面活性剂十二烷基硫酸钠水溶液作为提取溶剂,结合超声-微波辅助提取技术对喜树叶中活性物质喜树碱以及10-羟基喜树碱进行提取。同时对提取得到的10-羟基喜树碱进行后期的分离、纯化处理。研究的主要内容及成果如下:(1)建立了喜树碱以及10-羟基喜树碱高效液相色谱条件:全波长扫描确定检测波长265 nm,色谱柱为Diamonsil C18反相柱(5 μm,4.6 mm×150 mm);流动相为甲醇:水=55:45(V/V),柱温设定为25℃,流动相流速为1.0 mL/min,单次进样量为10μL。喜树碱和10-羟基喜树碱在所测范围内具有良好的线性关系。(2)选择不同种类表面活性剂水溶液:阴离子表面活性剂水溶液、阳离子表面活性剂水溶液、两性离子表面活性剂水溶液、非离子型表面活性剂水溶液,以及甲醇、乙醇、氯仿、乙酸乙酯进行了喜树碱及10-羟基喜树碱的溶解度测试,综合考虑成本、是否符合绿色化学、后期是否容易纯化等因素最终选择了表面活性剂十二烷基硫酸钠水溶液作为提取溶剂,十二烷基硫酸钠水溶液对喜树碱和10-羟基喜树碱的溶解度分别为25.8 μg/mL、79.3 μg/mL。(3)选取喜树的叶片,以表面活性剂十二烷基硫酸钠水溶液作为提取溶剂,在单因素基础上通过响应面优化设计,分别考察微波时间、料液比、微波功率、表面活性剂浓度4个因素对喜树叶中喜树碱以及10-羟基喜树碱的提取,通过数据分析处理得到喜树碱和10-羟基喜树碱总提取率最优工艺参数:微波时间10 min、料液比1:100、微波功率700 W、表面活性剂浓度8 g/L,在此条件下总提取率达到了 0.0549%。(4)制备提取液,将提取液进行大孔树脂初步纯化,选用AB-8型大孔树脂在室温下不改变pH值的情况下上样流速2 BV/h、平衡吸附时间7 h,用甲醇溶液1 BV/h的流速进行洗脱,洗脱量为8 BV,得到10-羟基喜树碱粗品,粗品纯度达到21%。(5)利用10-羟基喜树碱粗品作为纯化原料,通过单因素筛选得到对10-羟基喜树碱含量有影响的3个因素,利用响应面软件设计实验,分别考察10-羟基喜树碱粗品浓度、沉积时间、搅拌速度3个因素对10-羟基喜树碱含量的影响,得到最终分离纯化10-羟基喜树碱的最佳工艺参数:10-羟基喜树碱粗品浓度35 mg/mL、沉积时间6 min、搅拌速度2000 r/min,在此条件下得到10-羟基喜树碱含量85.49%。