【摘 要】
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背景:乳腺癌是目前全球女性发病率与死亡率最高的恶性肿瘤。因此临床上急切需求新的诊断方法与治疗方案。微小RNA（miRNA,microRNA）在乳腺癌中扮演着重要的角色。研究发现,miRNA在多种肿瘤的发生发展、耐药及诊断中均起重要作用,miRNA可以通过调控靶基因表达影响乳腺癌的发生发展,而靶基因的性质决定了 miRNA在肿瘤中的作用。踝蛋白（Talin）是一类大的、多结构域的胞膜蛋白,参与合成粘
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背景:乳腺癌是目前全球女性发病率与死亡率最高的恶性肿瘤。因此临床上急切需求新的诊断方法与治疗方案。微小RNA（miRNA,microRNA）在乳腺癌中扮演着重要的角色。研究发现,miRNA在多种肿瘤的发生发展、耐药及诊断中均起重要作用,miRNA可以通过调控靶基因表达影响乳腺癌的发生发展,而靶基因的性质决定了 miRNA在肿瘤中的作用。踝蛋白（Talin）是一类大的、多结构域的胞膜蛋白,参与合成粘着斑,已知的Talin基因有两种,Talin2被证实在多种肿瘤中起着重要作用。目的:研究miR-4324及其靶基因踝蛋白2（Talin2）在乳腺癌组织（Breast cancer tissue,BCT）、癌旁乳腺组织（Para-carcinoma breast tissue,PCBT）中的表达特点,结合病理资料分析二者的临床意义,并探讨miR-4324对Talin2调控和乳腺癌细胞相关活性的影响。方法:（1）采取qRT-PCR法,测定miR-4324在BCT和对应PCBT的表达;（2）miR-4324模拟物（mimics）转染人乳腺癌细胞株（SKBR-3）,分为对照组,miR-4324 mimics组,通过细胞增殖、凋亡实验、迁移和侵袭实验,检测SKBR-3的生物学活性改变,通过qRT-PCR法测定Talin2的表达;（3）利用荧光素酶活性实验验证miR-4324对Talin2靶向表达;（4）利用免疫组化法检验Talin2在BCT和对应PCBT的表达,并结合病理资料探讨Talin2的表达水平与乳腺癌患者的预后以及病理特征间的关联。结果:（1）相较于 PCBT,miR-4324 在 BCT 中表达降低[（-10.27±1.66）vs（-6.64±2.49）,P＜0.01];（2）相对于对照组,miR-4324 mimics 组 SKBR-3 细胞增殖在 24 h、48 h、72 h 和 96 h 均降低[（0.25±0.03）vs（0.28±0.04）;（0.44±0.02）vs（0.64±0.01）;（0.65±0.03）vs（1.02±0.01）;（0.81±0.02）vs（1.14±0.03）,P＜0.01];凋亡增多[（13.78±1.15）%vs（3.85±0.64）%,P＜0.01];迁移和侵袭实验显示 SKBR-3 细胞迁移[（31.9±2.82）%vs（7.73±1.60）%,P＜0.01]和侵袭能力降低[（81.33±30.83）vs（174.00±64.09）,P＜0.05];（3）生物信息学预测 Talin2 是 miR-4324 的靶基因之一,双荧光素酶报告基因检测证实,相对于control组,miR-4324 mimics共转染可显著降低 Talin2-3’-UTR WT 报告质粒的荧光素酶活性[（1.00±0.04）vs（0.74±0.10）,P＜0.05],而Talin2-3’-UTR MUT报告质粒的荧光素酶活性未见统计学差异[（1.00±0.07）vs（1.02±0.03）,P＞0.05];miR-4324 mimics 下调 Talin2 的表达[（0.82±0.27）vs（1.00±0.00）,P＜0.05];（4）Talin2在BCT中的表达高于PCBT,并与淋巴结转移、HER-2的高表达有相关性（P＜0.05）,而与年龄、临床分期、组织学分级及雌、孕激素受体（ER、PR）的表达间无明显相关性（P＞0.05）。结论:乳腺癌中miR-4324表达水平降低,过表达miR-4324通过下调Talin2表达抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,并诱导凋亡;Talin2在乳腺癌中高表达,并与淋巴结转移、HER-2高表达相关。表明miR-4324和Talin2可作为乳腺癌预后评估的生物标志物。
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