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毛细管电泳技术是80年代后期在全世界范围内迅速发展起来的一种分离分析技术,高效的分离分析效率使它越来越受到人们的关注,目前已经在药物分析,手性物质分离,生物大分子物质分析方面得到应用。我们研究室新近增添了毛细管电泳仪,主要用于植物材料中生物大分子的分析。由于国内采用该技术分析植物蛋白质的方法较少,因此本论文的目的主要是掌握仪器原理,学会操作使用,并建立毛细管电泳仪分离水溶性蛋白质的方法,为今后进一步开展植物蛋白质分析奠定基础。 首先以牛血清白蛋白和低分子量标准蛋白质为样品进行试验,对结果进行比较,初步确定了电泳的条件。结果表明使用长度为50cm,内径为50μm的毛细管,在25～35℃时的电泳效果较好,实验还对不同上样量的电泳结果的进行了比较和分析。 然后对使用区带毛细管电泳(CZE)分析水溶性蛋白质的方法做了初步研究。使用不同的pH值的磷酸盐缓冲液对水溶性蛋白质溶液进行了分析,证明pH值2.5时的分析效果要远优于碱性缓冲液;同时利用3-D电泳图谱选出了最佳的检测波长。 在分析单一成分的牛血清白蛋白样品和混合成分的低分子量标准蛋白样品取得较好分析效果的基础上,对鸡蛋水溶性蛋白质和油松胚珠的水溶性蛋白质进行了分析,取得了较好的分离效果,并确定了使用CZE分析水溶性蛋白质的电泳条件,为使用该仪器分析蛋白质奠定了基础。 实验还采用胶束电动毛细管色谱(MECC)对水溶性的蛋白质混合物进行了分析,电泳缓冲液中加入SDS后,水溶性蛋白质的吸附现象变的相对严重,分析效果有所下降。说明要使用这种毛细管电泳方法分析蛋白质还有需要对分析条件做进一步的改进。 另外,本文还讨论了各相关因素对电泳所产生的影响,并对其原因做了简单的分析,在此基础上对今后如何使用毛细管电泳对蛋白质进行分析提出设想。