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本论文研究了将电泳技术用于人血清蛋白组分的分离,探讨了分离后对人血清蛋白组分的检测。
论文分为两个部分,第一部分是以十二烷基磺酸钠(SDS)为添加剂利用高效毛细管电泳(HPCE)对人血清结合珠蛋白(Hp)两种不同亚型(1-1型和2-2型)的分析。研究发现,以人血清结合珠蛋白1-1型和2-2型两种标准品为研究对象时,在蛋白样品和预填充缓冲溶液中添加适量 SDS能够实现蛋白质的在线富集和微观不均一性分离。通过对pH值,缓冲溶液浓度,样品和预填充缓冲溶液中SDS浓度的影响评估,实现了利用微观不均一性的差异对两种结合珠蛋白亚型的区分,并对相应机理做了初步分析和讨论。实验表明,该方法可用于经过白蛋白(HSA)和免疫球蛋白G(IgG)去除的不同Hp亚型(1-1型和2-2型)正常人血清的区分;对于经过同样处理的β型地中海贫血病人的血清电泳分析表明,该方法可区分不同严重程度的地中海贫血病人Hp的缺失程度。快速高效、简单易行和在实际样品中的应用,为将本方法应用于临床分析和蛋白质组学研究打下了基础。
在本论文的第二部分,我们建立了以电负性小分子试剂四甲基乙二胺(TEMED)为增敏剂,利用CdTe量子点荧光成像检测聚丙烯酰胺凝胶电泳后人血清蛋白质的方法。该方法建立在蛋白质分子和CdTe量子点表面 Cd原子之间直接的静电相互作用和TEMED增强量子点荧光的理论基础之上。鉴于温和条件下,量子点不易与凝胶中蛋白质分子作用,我们选用碱浓度比较高的碱性条件,实现了对聚丙烯酰胺凝胶中人血清蛋白质的检测。同时,染胶溶液中加入小分子TEMED后,能够进一步增强荧光成像检测时的荧光强度,获得更好的实验结果。实验中优化了包括NaOH浓度、量子点浓度以及TEMED加入量在内的各种成像条件,研究并探讨了相关作用机理。研究表明,该方法可以直接应用于非变性的单向和双向聚丙烯酰胺凝胶电泳,同时还可应用于单向SDS胶中蛋白质的检测。