【摘 要】
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MADS-box基冈是指含有保守的DNA结合域MADS盒的转录调控因子,它们广泛存在于真核生物界。MADS是由几个最初发现的成员——酵母MCM1、拟南芥AGAMOUS、金鱼草DIFICIENS和人类SR
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MADS-box基冈是指含有保守的DNA结合域MADS盒的转录调控因子,它们广泛存在于真核生物界。MADS是由几个最初发现的成员——酵母MCM1、拟南芥AGAMOUS、金鱼草DIFICIENS和人类SRF——的首字母组合而米。MADS-box基因是一类重要调节基因,在植物发育(尤其是花器官发育以及同源异型转换中)过程中扮演着十分重要的角色。分离并研究MADS-box基因,将有助于探明植物生殖发育的分子模式,并为观赏植物和花卉品种的基因工程改良奠定基础。AGL15是MADS-box基因家族成员,研究显示具有延缓植物花朵衰老的功效,作用途径可能独立于乙烯介导的调控衰老途径。PMADS9是最近在观赏花卉矮牵牛中发现的AGL15亚家族基因,其功能尚未报道。本实验用农杆菌介导法将PMADS9基因导入矮牵牛,研究了PMADS9基因在矮牵牛中超量和反义表达对开花时间和花朵衰老的影响,从而确定PMADS9基因的功能。主要实验结果如下:1.矮牵牛植物材料的选择及培养激素研究通过对不同矮牵牛材料、不同植物激素组合的比较实验,确定了最适的矮牵牛材料A01和最适的矮牵牛A01叶片再生培养基:MS+BA2.0g/L+NAA0.1mg/L+蔗糖3%+琼脂粉0.7%,pH5.8,生根培养基:1/2MS+蔗糖3%+琼脂粉0.7%,pH5.8。2.矮牵牛遗传转化体系的优化通过不同农杆菌二次活化菌液浓度和不同侵染时间的比较实验,确定了最适的二次活化菌液浓度OD600=0.5-0.8,最适的浸染时间30S。抑制叶盘愈伤分化的筛选压,抑制生根筛选乐Km浓度为30mg/L。3.PMADS9基因对矮牵牛的遗传转化利用农杆菌介导法将pBL-PMADS9(+)、pBIN-PMADS9(-)导入矮牵牛中,分别获得7个独立的转pBL-PMADS9(+)矮牵牛抗性株系和8个独立的转pBIN-PMADS9(-)矮牵牛抗性株系,其中7个转pBL-PMADS9(+)株系全部存活并开花,3个转pBIN-PMADS9(-)株系存活并开花。4.转基因植株表型形状分析及PMADS9基因功能分析比较了阳性植株与未转化植株从移栽到开花的时间,结果显示PMADS9基因超量表达对推迟矮牵牛开花有一定作用。比较了花朵所在的独立花枝的叶片数和花枝高度,显示可见PMADS9基冈对开第一朵花时花枝叶片数有一定影响。而开第一朵花时花枝高度未见影响。比较了各转化株系与未转化株在活体花和鲜切花衰老时间上的差异,结果显示,PMADS9基因对活体花衰老有一定影响,PMADS9基因延迟活体花衰老;而切花衰老上PMADS9基因影响不明显。
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