苜蓿银纹夜蛾核多角体病毒（Autographa californica multiple nuclecopolyhedrovirus,AcMNPV）隶属于杆状病毒的Alphabaculovirus属,是目前研究的最为深入的杆状病毒。作为杆状病毒及普通病毒分子生物学研究的重要模式种,AcMNPV的病毒粒子形成机制还不明了。课题组前期的研究证明AcMNPV的ac146基因缺失后,在细胞中只形成了没有核衣壳的空多角体,病毒粒子形成受阻,本研究针对影响AcMNPV病毒粒子形成的ac146基因展开以下试验:一、为了研究ac146对病毒粒子形成的影响,取野生型病毒vAc^PH-GFP、缺失型重组病毒vAc^146KO-PH-GFP和回复型重组病毒vAc^{146Rep-PH-GFP}三种病毒的基因组转染Sf9细胞。相对于回复型重组病毒vAc^{146Rep-PH-GFP}和野生型病毒vAc^PH-GFP,缺失型重组病毒vAc^146KO-PH-GFP转染的Sf9细胞在转染后96h时没有出现荧光的扩散现象,暗示ac146缺失后,不能产生正常BV病毒粒子,从而导致无法实现病毒在细胞间的扩散。收集野生型病毒vAc^PH-GFP、缺失型重组病毒vAc^146KO-PH-GFP和回复型重组病毒vAc^{146Rep-PH-GFP}转染后120h的细胞上清,用上清分别感染Sf9细胞,观察细胞中的荧光现象,结果显示用回复型重组病毒和野生型病毒转染的细胞上清进行感染的细胞中都出现了预期的荧光,说明二者转染的细胞上清中均产生了正常的感染性BV病毒粒子,而用缺失型重组病毒转染的细胞上清进行感染的细胞中没有出现荧光,进一步证明ac146缺失后不能形成感染性的BV病毒粒子。二、基于Virginia L等通过Western-blot检测出Ac146蛋白有两种分子形式:23k Da和34k Da,但没有通过质谱等技术最终证明这两种分子形式。本研究结合Western-blot和质谱技术研究了Ac146蛋白的存在形式。用vAc^{146Rep-PH-GFP}转染Sf9细胞,利用ac146基因末端融合的HA-tag进行Ac146蛋白的免疫印迹检测。本研究共提取了两种蛋白质混合物进行目的蛋白的免疫印迹检测,一种是感染后全细胞蛋白,一种是纯化的ODV全蛋白。对Western-blot检测结果的预期位置条带进行质谱鉴定,质谱鉴定结果显示:以全细胞蛋白为样品的23k Da条带处鉴定到了Ac146蛋白的存在,但在纯化的ODV总蛋白中未检测到Ac146蛋白,因此本研究结果显示Ac146蛋白可能只有23k Da一种分子存在形式。三、由于ac146的缺失病毒粒子不能正常形成,本研究利用酵母双杂交技术鉴定了能与Ac146蛋白发生分子互作的蛋白成员,以期揭示Ac146蛋白在病毒核衣壳上的结构作用。首先构建了ac146的酵母重组诱饵载体和14个与病毒粒子形成有关的衣壳蛋白的酵母重组捕获载体（ac66、ac69、ac77、ac80、ac89、ac92、ac98、ac100、ac101、ac103、ac104、ac141、ac142、ac146）。通过营养缺陷筛选、X-α-gal显色和PCR验证,最后结果显示,有两个蛋白能分别与Ac146蛋白发生分子互作（Ac103蛋白和Ac141蛋白）。