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目的:卵巢癌是生殖系统三大恶性肿瘤之一,具有较高的发病率和死亡率。上皮来源的卵巢癌是卵巢恶性肿瘤中最常见的病理类型,约占85%-90%。上皮性卵巢癌的治疗以手术治疗为主,辅助以铂类为基础的联合化疗。尽管如此,患者术后5年生存率仍不足30%。究其原因,与卵巢癌易复发和化疗耐药密切相关。开发研制有效的治疗药物、进一步完善更为有效的治疗手段和策略是提高卵巢癌患者总体生存率的关键,而肿瘤分子靶向治疗成为改善上皮性卵巢癌患者预后的突破点。表皮生长因子受体（Epidermal growth factor receptor,EGFR）是经典的酪氨酸激酶受体之一,被证实在包括卵巢癌在内的多种上皮性实体肿瘤中表达上调,EGFR基因突变及其表达上调与肿瘤的发生、发展和患者预后密切相关。目前多种靶向EGFR的抗肿瘤药物已于临床一线使用。促进EGFR与配体结合后进入细胞内降解,减少通过循环回到细胞膜表面的EGFR,是负向调控EGFR的重要机制之一。溶酶体相关跨膜蛋白5（Lysosome-associated protein transmembrane 5,LAPTM5）,是溶酶体跨膜蛋白家族成员之一,位于细胞内溶酶体膜表面。研究显示,在CD40阳性的胶质瘤中,LAPTM5通过抑制CD40介导的核因子-κB（Nuclear factor-κB,NF-κB）通路激活,降低肿瘤侵袭能力,并增加肿瘤细胞对抗肿瘤药物替莫唑胺的敏感性。在睾丸生殖细胞瘤组织中,LAPTM5表达水平显著升高,且其表达水平与睾丸生殖细胞瘤患者的预后密切相关。此外,外源性敲减膀胱癌细胞中的LAPTM5,能够抑制膀胱癌细胞增殖,诱导细胞周期阻滞。而在食管癌中低表达的LAPTM5直接关联患者的不良预后,由此提示LAPTM5表达水平及其活化状态与肿瘤的发生发展相关。鉴于上皮性卵巢癌对女性健康的危害及其临床疗效的局限性,本研究拟探讨LAPTM5在上皮性卵巢癌发病机制中的作用及其相关分子机制,为上皮性卵巢癌的分子靶向治疗提供新思路和新靶标。方法:1.收集2010年至2020年因卵巢癌或卵巢良性肿瘤于中国医科大学附属第四医院妇科手术治疗的患者存档石蜡切块标本,包括80例上皮性卵巢癌组织标本和20例上皮性卵巢良性肿瘤组织标本;另收集因卵巢癌或卵巢良性肿瘤行手术治疗的患者手术切除病灶组织冰冻标本各10例。免疫组织化学、Western blot检测上皮性卵巢癌组织和卵巢良性肿瘤组织中LAPTM5蛋白表达水平,分析LAPTM5表达水平与上皮性卵巢癌临床病理类型之间的相关性。通过数据库检索生物信息学分析LAPTM5在上皮性卵巢癌组织中的表达情况。2.通过Western blot检测不同上皮性卵巢癌细胞系中LAPTM5蛋白表达情况,分别挑选表达上调和下调的细胞系进行后续实验;通过LAPTM5 si RNA构建敲减LAPTM5的细胞系,通过过表达LAPTM5慢病毒感染细胞构建稳定过表达LAPTM5的细胞系,Western blot、qRT-PCR检测转染效率;CCK-8、平板克隆形成实验检测LAPTM5对上皮性卵巢癌细胞增殖情况的影响;流式细胞仪检测细胞周期;细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测LAPTM5对上皮性卵巢癌细胞迁移、侵袭能力的影响。3.Western blot、qRT-PCR分别检测敲减LAPTM5和过表达LAPTM5细胞中EGFR表达量变化;免疫共沉淀分析在上皮性卵巢癌细胞中LAPTM5与EGFR相互作用;通过蛋白质合成抑制剂、蛋白酶体抑制剂和溶酶体抑制剂处理细胞,分析LAPTM5促进EGFR蛋白表达下调的具体机制;Western blot检测敲减LAPTM5和过表达LAPTM5细胞中EGFR下游信号传导通路关键蛋白p-AKT、p-ERK的表达变化。Western blot、qRT-PCR分别检测敲减LAPTM5和过表达LAPTM5细胞中E3泛素化连接酶c-Cbl表达量变化;免疫共沉淀分析在上皮性卵巢癌细胞中LAPTM5与E3泛素化连接酶c-Cbl相互作用。4.构建人卵巢癌实验动物模型:将过表达LAPTM5的人卵巢腺癌细胞OVCAR3注射于裸鼠右侧腋下,每3天监测并记录裸鼠体重和皮下肿瘤体积。21天后,对裸鼠实施安乐死,取出皮下肿瘤组织进行测量和称重。肿瘤组织石蜡切片,HE染色,免疫组化检测LAPTM5、Ki67、PCNA、EGFR表达情况。结果:1.与卵巢良性肿瘤组织相比,LAPTM5在上皮性卵巢癌组织中高水平表达,且III-IV期上皮性卵巢癌患者肿瘤组织中的LAPTM5的表达水平显著高于I-II期上皮性卵巢癌患者。数据库检索生物信息学分析显示,LAPTM5 m RNA在上皮性卵巢癌组织中的表达水平高于正常卵巢组织,并且与卵巢癌患者的不良预后相关。2.CCK-8实验和平板克隆形成实验结果提示,过表达LAPTM5促进肿瘤细胞增殖,敲减LAPTM5抑制细胞增殖。细胞周期结果显示,敲减LAPTM5诱导上皮性卵巢癌细胞G0/G1期细胞周期阻滞。细胞划痕实验和Transwell侵袭实验的结果表明,LAPTM5的过表达促进上皮性卵巢癌细胞迁移和侵袭;而敲减LAPTM5抑制上皮性卵巢癌细胞迁移和侵袭。3.裸鼠皮下成瘤实验结果显示,接种过表达LAPMT5的OVCAR3细胞的裸鼠,其体内肿瘤生长速率、肿瘤体积、肿瘤重量均较对照组明显增加。肿瘤组织的免疫组化结果表明,LAPTM5过表达可促进肿瘤细胞增殖,且诱导其EGFR蛋白表达水平上调。4.Western blot结果显示敲减LAPTM5,下调EGFR及其下游p-AKT、p-ERK蛋白表达水平;与此相反,过表达LAPTM5上调EGFR蛋白表达,同时增加其下游蛋白p-AKT、p-ERK表达量。免疫共沉淀结果证明LAPTM5与EGFR相互作用。放线菌酮（Cycloheximide,CHX）实验结果提示与对照组相比,敲减LAPTM5明显缩短了EGFR的半衰期。溶酶体抑制剂氯喹抑制了因敲减LAPTM5而增加的EGFR降解速率,表明LAPTM5促进了EGFR溶酶体途径的降解。5.E3泛素化连接酶c-Cbl是EGFR溶酶体降解的关键步骤。免疫共沉淀结果证明LAPTM5与c-Cbl相互作用,敲减LAPTM5上调c-Cbl蛋白表达量,而c-Cbl蛋白表达水平与EGFR溶酶体降解密切相关。结论:1.LAPTM5在上皮性卵巢癌中表达上调,与肿瘤分期和患者不良预后相关。2.LAPTM5表达水平影响上皮性卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤体内进展。3.LAPTM5通过与E3泛素化连接酶c-Cbl相互作用,促进EGFR溶酶体途径降解,调控EGFR信号传导通路,促进上皮性卵巢癌发生发展。