目的机体受到电离辐射后,所产生的生物效应的轻重,与受照的剂量有重要关系。急性放射病(acute radiation sickness,ARS)是指一次或短时间(数日)内分次受到大剂量射线照射引起的全身性疾病。一般来说,人体受到1Gy左右的全身均匀或比较均匀的射线照射后,就可能发生急性放射病。目前采用积极的综合治疗手段,受到6Gy以下射线照射的ARS病人可以治愈。越早治疗,患者的全身病理变化越少。受到8Gy以上照射的病人因短时间内各个系统病变较快,病情太重,没有长期生存记录。可见,ARS的治疗有赖于对受照人员具体受照剂量的快速诊断。微核试验(micronucleus test,MNT),近年来成为估算辐射生物剂量、评价各种物理化学物质的遗传毒性的必做试验。常规的胞浆分裂阻滞微核法淋巴细胞微核试验,由于需要淋巴细胞培养(需要约72h)和人工镜检含微核的双核淋巴细胞,既费时又费力,而逐渐被自动化的网织红细胞微核试验所取代,检测采用流式细胞仪检测,这样就大大提高了检测速度。本实验旨在建立的自动化网织红细胞微核试验,以便为人类急性放射病患者受照剂量的快速估算提供实验基础。方法1.建立受照小鼠模型:将随机分组的SPF级雄性BALB/c小鼠分别给予多剂量点60Coγ线源照射,照后24h及48h分别处死取骨髓标本检测。2.采用流式细胞仪,建立本实验室检测小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率的自动化方法,并与显微镜人工镜检检测结果进行比较,验证该方法的准确性。检测多剂量点60Coγ线照后24h及48h小鼠骨髓标本嗜多染红细胞微核率,仍与人工镜检方法进行比较。3.若自动化检测结果在一定剂量范围内符合有一定的剂量-效应关系,则对这个剂量范围内的结果,拟合小鼠受照后自动化检测骨髓嗜多染红细胞微核率的剂量-效应曲线。4.建立人骨髓嗜多染红细胞微核率及外周血网织红细胞微核率自动化检测的方法,并与人工显微镜检法检测结果进行比较,检测方法准确性。5.应用自动化方法检测放射查体人员(放射线长期接触相关工作人员)外周血标本,与人工显微镜检方法检测结果进行对照。6.应用自动化方法检测2名可疑受照人员外周血标本,与胞浆分裂阻滞微核法检测结果进行比较,带入我实验室原有的CBMN法剂量-效应关系方程,估算放射其受照剂量。结果1.建立了本实验室自动化微核试验的方法,包括对小鼠骨髓标本、人骨髓标本及人外周血标本的检测。2.对于小鼠骨髓标本,流式细胞术检测结果与人工显微镜检结果具有明显的一致性,相关系数为0.987,虽然流式细胞术检测的结果均较人工镜检偏高,但经统计学分析,二者的差异不具有统计学意义(p>0.05)。且流式细胞术检测法明显更加省时、省力,且人工显微镜检测,由于检测人员的不同,检测的标准也稍有差异,而流式细胞仪自动检测则避免了这种主观性,检测结果更为客观。3.Balb/c小鼠接受60Co-γ射线照射,在一定剂量范围内(本实验中为0-6Gy),小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率是良好的反映辐射生物剂量的指标,其检测值与受照剂量之间呈现良好的剂量-效应关系;受照后48h检测标本,其嗜多染细胞微核率较受照后24h检测标本得到的结果明显增高,表明小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率与受照时间之间呈现良好的时间-效应关系。4.通过自动化检测及对照CBMN法检测两名可疑受照人员的外周血标本,大致确定其受照剂量分别为0.15Gy左右。证明网织红细胞微核是较为敏感的辐射生物剂量标志物。结论1.建立了自动化微核试验的方法,包括对小鼠骨髓标本、人骨髓标本及人外周血标本的检测。证明网织红细胞微核是敏感的生物剂量计,并可以作为自动化诊断的对象,用于急性放射病生物剂量的快速估算,为标本的检测节省大量时间及人力。2.证明采用流式细胞仪自动化检测的方法较传统的显微镜检方法更加省时省力和客观,更为适合用于受照后个体的快速诊断,特别是大规模辐射事故后人员辐射生物剂量的快速诊断。在以后的继续研究中,有可能取代传统的人工显微镜镜检方法。3.通过检测正常献血员、放射查体人员外周血标本,为进一步研究人类急性放射病受照剂量快速诊断提供实验基础。4.首次建立了人类骨髓网织红细胞微核率的自动化检测方法,骨髓标本的检测可以省略网织红细胞富集分离的步骤,能够节省标本处理时间,提高微核的检出率,为进一步进行放射病患者受照剂量快速诊断提供了实验基础。