赤羽病又名阿卡斑病(Akabane disease),是由赤羽病病毒(Akabane virus,AKAV)所引起的牛、绵羊和山羊的一种多形性传染病,以牛、羊的流产、早产、死产及先天性关节弯曲和积水性无脑症(Arthrogryposis–Hydraencephaly,AH综合症)为特征。病毒基因组编码4种结构蛋白,即两种膜内蛋白L、N和2两种膜外蛋白G1、G2,其中G1蛋白能够诱导宿主产生强烈的特异性免疫反应,是AKAV主要的囊膜糖蛋白,决定AKAV的许多重要的生物学特性,如致病性、中和反应、血凝性和细胞结合等。本试验根据GenBank中已发表的AKAV OBE-1株的M片段序列设计一对引物,以AKAV OBE-1株的总RNA为模板,通过RT-PCR获得G1基因,克隆至pMD18-T载体。经测序鉴定正确后,将该片段作为目的基因亚克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统中的pFastBacHT A转移载体质粒中,利用Tn7转座子与穿梭载体Bacmid DNA同源重组,获得了重组杆状病毒DNA,用CELLFECTIN介导其转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BAC-G1P1。SDS-PAGE结果表明,感染BAC-G1P1后的Sf9昆虫细胞表达可溶形式的120kD目的蛋白。Western blot和间接免疫荧光试验显示表达产物具有良好的免疫学活性。利用生物学软件DNAstar对G1蛋白的氨基酸序列进行分析,筛选出抗原性较好的基因片段G1-2作为目的片段,经PCR扩增后,插入pMD18-T载体。经测序鉴定正确后,将该片段定向亚克隆于pET-28a (+)表达载体中,转化至BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达。经SDS-PAGE和Western-blot分析,诱导表达产物以包涵体的形式存在,大小约为44kD,且具有免疫学活性。亲和纯化后的融合蛋白浓度为2mg/ml,纯度为92.6%。以该融合蛋白作为诊断抗原,建立了间接ELISA诊断方法。确定的抗原包被浓度为20μg/ml,血清最佳稀释度为1:200。交叉试验表明该方法对牛常见的6种疾病阳性血清无交叉反应。应用该方法对病毒微量中和试验检测过的云南(77份)和内蒙(70份)牛血清样品进行了检测。以中和试验为参照,通过统计学处理,得出两地临界值分别为0.493和0.488,本方法的特异性为73%和86.9%,二者的符和率分别为80%和85.9%。