【摘 要】
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背景:人参作为一种传统的中草药,已被广泛用于保健和治疗某些慢性病。人参皂苷是人参的主要活性成分之一,具有良好的抗炎、抗肿瘤等多种药理作用。AD-1[20（R）-25-甲氧基-达玛烷-3β,12β,20-三醇]是一种新的人参皂苷衍生物。炎症性肠病（IBD）是一种慢性肠道炎症性疾病,发病机制尚不明确,反复发作并伴有严重的并发症。因此,寻找新的治疗方法,对于改善IBD的预后具有重要意义。NOD样蛋白受体
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背景:人参作为一种传统的中草药,已被广泛用于保健和治疗某些慢性病。人参皂苷是人参的主要活性成分之一,具有良好的抗炎、抗肿瘤等多种药理作用。AD-1[20（R）-25-甲氧基-达玛烷-3β,12β,20-三醇]是一种新的人参皂苷衍生物。炎症性肠病（IBD）是一种慢性肠道炎症性疾病,发病机制尚不明确,反复发作并伴有严重的并发症。因此,寻找新的治疗方法,对于改善IBD的预后具有重要意义。NOD样蛋白受体3（NLRP3）在IBD发生发展过程中起重要作用,但是AD-1在IBD发展中的具体作用尚不明确。目的:探讨AD-1是否对于TNBS诱导的急性IBD小鼠模型具有治疗作用,以及作用机制是否为抑制NLRP3炎症小体的活化来改善疾病的炎症程度。方法:6-8周龄的雄性C57BL/6小鼠适应性饲养7天后,随机分为正常对照组（Control）、乙醇对照组（Alcohol）、模型组（TNBS）、治疗组（AD-1）和阳性对照组（5-ASA）,每组10只,后三组于造模前7天每日采用1%的TNBS乙醇溶液涂抹于小鼠背部皮肤进行预敏化处理,造模日于禁食12小时后采用2.5%的TNBS乙醇溶液灌肠给药,每只小鼠灌入100μl,正常对照组和乙醇对照组采用上述同样的方法分别灌入相同体积的生理盐水和25%的乙醇溶液,治疗药AD-1（10mg/kg）和阳性对照药5-ASA（30mg/kg）分别溶于0.5%羧甲基纤维素钠（CMC）中,于灌肠造模后的第2天进行灌胃给药,正常对照组和乙醇对照组分别灌胃CMC,每只小鼠灌胃200μl,灌胃时间为连续4天,第6天处死小鼠。在整个实验过程中监测小鼠的疾病活动指数（DAI）;造模结束后,取小鼠的结肠并测量结肠长度;HE染色方法观察小鼠结肠炎症病理变化;利用RT-PCR和WB实验方法检测小鼠结肠组织的促炎细胞因子、紧密连接蛋白和NLRP3炎症小体的表达水平;利用ELISA实验方法检测小鼠血清IL-1β、IL-18的表达水平。数据采用Graphpad prism7软件进行统计学处理。结果:1.AD-1明显改善由TNBS诱导的急性IBD小鼠体重下降情况,降低DAI评分,缓解结肠长度缩短。2.HE染色结果显示,模型组中,隐窝结构破坏增加以及杯状细胞减少,大量的炎性细胞浸润,治疗组中,隐窝结构局部消失,少量杯状细胞,炎症细胞浸润较少。3.RT-PCR方法检测小鼠结肠组织中促炎细胞因子的表达,结果显示,与模型组相比,治疗组结肠组织中IL-6（P＜0.01）、TNF-α（P＜0.05）的m RNA表达均降低,具有统计学意义。4.RT-PCR方法检测小鼠结肠组织中NLRP3炎症小体及下游细胞因子的表达,结果显示,与模型组相比,治疗组结肠组织中NLRP3（P＜0.01）、ASC（P＜0.001）、Caspase-1（P＜0.01）、IL-1β（P＜0.001）、IL-18（P＜0.01）的m RNA表达均降低,具有统计学意义。5.WB方法检测小鼠结肠组织中促炎细胞因子的表达,结果显示,与模型组相比,治疗组结肠组织中IL-6（P＜0.01）、TNF-α（P＜0.05）的蛋白表达均降低,具有统计学意义。6.WB方法检测小鼠结肠组织中促炎细胞因子,NLRP3炎症小体及下游细胞因子的表达的表达,结果显示,与模型组相比,治疗组结肠组织中NLRP3（P＜0.001）、ASC（P＜0.01）、Caspase-1（P＜0.001）、IL-1β（P＜0.05）、IL-18（P＜0.01）的蛋白表达均降低,具有统计学意义。7.WB方法检测小鼠结肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin的表达水平,结果显示,与模型组相比,治疗组中的ZO-1（P＜0.01）、Occludin（P＜0.001）表达升高,具有统计学意义。8.ELISA方法检测小鼠血清中IL-1β、IL-18含量的表达,结果显示,与模型组相比,治疗组中IL-1β、IL-18（P＜0.05）的表达下降,差异具有统计学意义。结论:人参皂苷衍生物AD-1具有改善TNBS诱导的小鼠急性IBD的作用,其机制可能是通过抑制NLRP3炎症小体的活化进而减轻炎症程度。
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