益气活血通络法对局灶性脑缺血/再灌注大鼠学习记忆及海马突触可塑性相关蛋白GluR1、CaMKⅡ、PKA的影响

来源 :安徽中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luminfeng
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的以“气血—脑髓”相关的中医理论为基础,在课题组前期应用益气活血通络法对局灶性脑缺血/再灌注(MCAO/R)大鼠神经可塑性的研究基础之上,选用益气活血通络法及其代表方脑络欣通对局灶性脑缺血/再灌注(MCAO/R)模型大鼠进行给药干预治疗,观察给药14d后MCAO/R大鼠学习记忆能力及动态观察给药后3d、7d、14d局灶性脑缺血/再灌注(MCAO/R)模型大鼠缺血侧海马CA4区GluR1、Ca MKⅡ及海马PKA蛋白的变化。探讨益气活血通络法对局灶性脑缺血后学习记忆及海马突触可塑性的影响及其作用机制。方法选用雄性健康的SD大鼠160只,体重在300±20g范围内。将大鼠通过随机数值表法分为分为5个组,分别是假手术组(J组)、模型组(M组)、益气活血通络法组(YH组)、益气法组(Y组)、活血通络法组(H组),每组分别为32只,每组再分3d、7d、14d三个亚组。每组3d、7d的亚组均为9只,14d的亚组均为14只,在每组14d的亚组内依据随机数字表法各取出5只用于水迷宫实验。通过改良线栓法建造大鼠右侧大脑中动脉缺血再灌注(MCAO/R)模型,并依据Zea Longa评分标准对MCAO/R大鼠神经功能体征作出评分,选用2分、3分者。造模24h后,脑络欣通、益气方及活血通络方分别以8.54g/kg、3.5g/kg、5.04g/kg的剂量给予各组大鼠灌胃,每天两次。在灌胃14d后,Morris水迷宫观察大鼠学习记忆能力。在灌胃第3d、7d、14d后分别使用4%多聚甲醛心脏内灌注固定后,进行开颅取脑,或直接开颅取新鲜脑,剥离海马。Morris水迷宫检测各组大鼠定位航行、空间探索能力。免疫组化Envision二步法检测各组大鼠缺血侧海马CA4区GluR1、Ca MKII的表达。Western blot检测缺血侧海马PKA蛋白的表达。DB801型水迷宫视频分析系统对各组大鼠定位航行时间及空间探索数据进行采集。JD801图像分析系统对免疫组化检测所摄GluR1、Ca MKⅡ蛋白图片进行分析,并计算表达阳性面积。对Western blot曝光所得的条带使用Image J软件进行分析,并且计算蛋白相对表达量。使用IBM SPSS Statistics 23.0对数据进行统计处理,计量资料用Mean±S(`x±s)表示,各组之间使用单因素方差分析,且两两之间使用LSD相互比较,其中P<0.01具有差异显著性,P<0.05具有统计学差异。Graph Pad Prism 5软件制作统计图,word 2019软件制作统计表。结果Morris水迷宫显示:与J组相比,M组逃避潜伏期的时间显著延长(P<0.01),目标象限停留时间及穿越平台次数明显减少(P<0.01);YH组、Y组、H组与M组相比,逃避潜伏期的时间减少(P<0.05),目标象限停留时间及穿越平台次数增多(P<0.05);Y组、H组与YH组相比,逃避潜伏期的时间增多(P<0.05),目标象限停留时间及穿越平台次数降低(P<0.05);H组与Y组相比,逃避潜伏期及目标象限停留的时间、穿越平台的次数无显著差异(P>0.05)。免疫组化检测表明:(1)GluR1蛋白在MCAO大鼠右侧大脑缺血灶海马CA4区显现的是棕黄色,主要表达在神经细胞膜中。在海马CA4区部位中,GluR1蛋白在J组3d、7d、14d三个时间点阳性表达量较多,M组的GluR1蛋白与J组各时间点相比较阳性表达量降低且表达阳性面积差异具有显著性(P<0.01);各时间点YH组、Y组与H组GluR1蛋白与M组相比较阳性表达量增多,并且表达阳性面积差异具有显著性(P<0.01);与YH组相比较,在各时间点Y组、H组GluR1阳性表达量下降,并且表达阳性面积具有差异性(P<0.05);各时间点H组GluR1蛋白与Y组相比较表达阳性面积在统计学中无差异性(P>0.05)。(2)Ca MKⅡ蛋白表达在MCAO大鼠右侧大脑缺血灶海马CA4区显现的颜色为棕黄色,主要表达在神经细胞膜及胞浆中。在海马CA4区部位中,Ca MKⅡ蛋白在J组三个时间点中阳性表达量较多,各时间点M组Ca MKⅡ蛋白与J组相比较表达阳性面积减少且差异具有显著性(P<0.01);YH组、Y组与H组在各时间点中Ca MKⅡ蛋白与M组相比较表达阳性面积增加且差异具有显著性(P<0.01);与YH组相比较,各时间点Y组、H组Ca MKⅡ蛋白阳性表达量下降,并且表达阳性面积具有差异性(P<0.05);H组各时间点的Ca MKⅡ蛋白与Y组相比较表达阳性面积在统计学中无差异性(P>0.05)。免疫印迹法检测表明:J组PKA蛋白在MCAO大鼠右侧大脑缺血灶海马表达量较少,各时间点M组PKA蛋白与J组相比较表达量上升,其中3d、7d蛋白表达量差异具有显著性(P<0.01),14d蛋白表达量具有差异性(P<0.05);YH组、Y组与H组各时间点的PKA蛋白与M组相比较表达量增加,其中7d、14d蛋白表达具有显著差异性(P<0.01),3d蛋白表达具有统计学意义(P<0.05);Y组、H组在各时间点PKA蛋白与YH组相比较表达量降低,且具有显著差异性(P<0.01);H组各时间点PKA蛋白与Y组相比较,蛋白表达量在统计学中无差异性(P>0.05)。结论益气活血通络法及其代表方脑络欣通可能是通过上调缺血侧海马CA4区GluR1、Ca MKII,海马PKA蛋白表达水平,从而提高缺血侧海马区的突触可塑性,减轻脑组织损伤,进而促进学习记忆能力恢复。
其他文献
教学评价是教学体系中至关重要的组成部分,教师可以通过教学评价及时获取教学效果的反馈信息,全面了解学生学习情况,从而针对自身的优缺点完善教学体系,而学生可以通过学习效果的反馈信息扬长避短,在学习上取得更大的成就。文章通过查阅文献、课堂观察等方法探索并归纳新课程标准下初中英语教学评价体系的构建策略,旨在完善评价体系以期提升英语教学实效性。首先分析了现阶段初中英语教学评价存在的问题,主要有忽视学生主体作
期刊
目的:分析我国商业健康保险参保对家庭贫困发生率的影响及其异质性。方法:利用2018年CHARLS数据,通过Logistic和PSM模型进行分析。结果:商业健康保险参保可使家庭绝对和相对贫困发生率分别降低6.2和8.9个百分点。运用PSM控制样本选择性偏误后,家庭绝对和相对贫困发生率显著降低7.4和8.8个百分点。商业健康保险参保可使农村家庭组、老年家庭组、健康一般家庭组绝对贫困发生率分别下降8.2
期刊
目的:探讨基于治痿独取阳明理论手指点穴对降低危重患儿获得性衰弱(ICU-acquired weakness,ICU-AW)发生率的临床可行性。找寻PICU开展危重患儿早期康复对危重患儿住院期间四肢肌力、肌肉厚度、机械通气时间、生活自理能力、住院时间及住院费用等的影响,并分析临床安全性,提高医护人员对ICU-AW的重视度,进一步提升儿童重症监护病房(Pediatric Intensive Care
学位
目的从Orem理论中辅助-教育系统入手,探讨指导并教会患者穴位按摩的方法,在急性神经性耳鸣患者中的应用效果,与常规护理做对比,观察临床治疗效果,从而总结出较为优越的护理方案,提高患者在住院期间的满意度,为专科专病临床护理提供新思路。方法选取2021年7月至2021年12月于云南省某三甲医院耳鼻咽喉科44例急性神经性耳鸣的患者为研究对象,将符合纳入/排除标准的患者按办理入院时间的顺序,运用随机数字表
学位
目的基于“子午流注学说”,以ICU患者为研究对象,探讨冰茶灵洗剂行口腔护理的最佳使用时机和使用频次,为ICU患者的口腔护理提供新思路和新策略。评价按照人生理时间节律特性及其生理变化规律原理,对ICU患者合理的应用冰茶灵洗剂行口腔护理的有效性和实用性,探索一种既满足ICU患者特殊性,又满足时间因素与人体生命活动节律的影响,结合冰茶灵洗剂药物的特点,突出人体生理活动变化中的生理时间昼夜节律,选择最佳合
学位
目的:本研究通过观察骨盛汤联合小夹板外固定治疗老年患者肱骨外科颈骨折的临床治疗效果,从而探索祖国医药对于老年HSNF患者治疗的独特优势,基于老年患者天癸已去,肝肾不足的生理基础上,探寻骨折中后分期的治疗方法,以期提供更多的临床治疗选择,提升患者临床治疗的满意度。方法:收集来自我院骨科患有老年肱骨外髁颈病例60例,通过随机数字表的方法将其分为观察组(骨盛汤)和对照组(续骨活血汤)。所有骨折患者均予以
学位
目的:通过对中药方剂治疗膝关节骨关节炎的Meta分析,回顾分析中药方剂在治疗KOA的相关文献存在的问题、评价其质量及如何完善临床RCT实验的研究方案的设计、Meta分析的实验设计提供一些借鉴及参考意义。方法:通过查阅知网(CNKI)、万方(Wangfang)、维普(VIP)、国家科技图书文献中心(NSTL)4大中文数据库,Pubmed、Cochrane Library(循证生物医学图书馆)、Emb
学位
目的:观察艾灸结合西药对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心功能、血清NT-pro BNP、心肌组织病理形态、心肌细胞凋亡率及线粒体凋亡相关蛋白细胞色素c(Cyt-C)、凋亡诱导因子(AIF)表达水平的影响,探讨艾灸结合西药对慢性心力衰竭(CHF)可能发挥的作用机制。方法:将65只SPF级健康成年雄性SD大鼠随机分为13笼,5只/笼,给动物编号后,根据随机数表法随机选取10只(2笼)大鼠为正常组,55只(
学位
实验目的:通过对全髋关节置换术后的患者应用补阳还五汤加味,探究其对患者术后血液高凝状态的影响以及其作用机制和安全性,为临床中西联合用药预防全髋关节置换术后下肢深静脉血栓形成提供新的方法和临床依据。实验方法:选择2019年5月-2020年8月于我院骨科住院部拟行初次全髋关节置换术的患者80例,按照随机数字表法随机分成联合组和对照组。两组手术均有科室内同一组手术医生操作,均采用全身麻醉的麻醉方法。对照
学位
实验目的:通过盐酸甲氧氯普胺注射液建立高泌乳素诱导的乳腺导管扩张SD大鼠动物模型,探讨中药丹参化瘀汤对高泌乳素状态下乳腺导管扩张大鼠血清T淋巴细胞及免疫球蛋白水平影响;探讨其作用机制,以期指导临床应用。实验方法:50只雌性未孕SD大鼠以通用鼠料及自来水饲养一星期,随机分为5组10笼,每笼5只,分别标记为空白对照组、模型组、低剂量中药组、中剂量中药组和高剂量中药组,空白组10只SD大鼠予以正常饮食,
学位