Twist基因沉默与Caski细胞系PI3K/Akt/Bad通路相关分子的分析

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目的:分析Twist基因表达降低与宫颈癌Caski细胞对紫杉醇化疗敏感性,并研究其与PI3K/Akt/Bad信号通路的相关蛋白的关系。方法:生物信息学方法分析Twist基因低表达载体的序列,构建干扰Twist基因表达的重组载体,通过脂质体介导将Twist-shRNA干扰质粒稳定转染至人宫颈癌Caski细胞中,建立稳定低表达Twist基因的细胞系(Caski-Twist-shRNA)及空白载体转染组(Caski-shRNA-NC组)。用不同浓度的紫杉醇(PTX)处理三组细胞(Caski-Twist-shRNA+PTX、Caski-shRNA-NC+PTX、Caski+PTX)后,RT-PCR检测各组细胞中Twist mRNA的表达, MTT检测各组细胞的增殖能力,Westernblot检测PI3K、Akt、Bad蛋白的表达情况。结果:脂质体转染Twist-shRNA到Caski细胞系后,获得了稳定低表达Twist基因的Caski-Twist-shRNA细胞系及空白载体转染组;RT-PCR检测结果发现TwistmRNA表达水平在Caski-Twist-shRNA明显下降,与空白载体转染组、未转染组比较,差异有显著性意义(p﹤0.05);不同浓度紫杉醇处理各组细胞后,Caski-Twist-shRNA+PTX组的增殖抑制率较Caski-shRNA-NC+PTX组、Caski+PTX组与Caski组显著升高(p﹤0.05); Western blot结果显示Caski-Twist-shRNA+PTX组中PI3K、Akt蛋白表达水平较Caski-shRNA-NC+PTX组、Caski+PTX组与Caski组均明显降低(p<0.05),而Caski-shRNA-NC+PTX组中Bad的蛋白表达较Caski-shRNA-NC+PTX组、Caski+PTX组与Caski组均显著升高(p<0.05)。结论:Twist基因表达下调,能使Caski细胞对紫杉醇化疗敏感性增强,导致PI3k、Akt表达下调及Bad表达上调。
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