半滑舌鳎肠道抑制水产病害菌的乳酸菌的筛选、鉴定及其抑菌机制研究

来源 :江苏海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:rockyliangchao
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我国是水产养殖大国,渔业经济在整个国民经济中的比重逐年提高。随着渔业养殖规模的不断扩大,水产病害的发生机率也日益增加。目前行业防治水产病害的主要方式还是在饲料中添加抗生素类药物为主,不仅对环境造成一定程度的污染,也导致抗生素在鱼类体内的富积,对处于食物链顶端的消费者的健康构成威胁。因此,如何更合理有效的防治水产病害以及采取何种绿色无污染的途径是当下水产养殖业面临的首要问题。乳酸菌作为一类公认的益生菌,其本身具有一定促进机体消化,维持生物体内正常稳态的作用,同时相关研究表明,其在发酵过程中产生的多糖、多肽及其衍生物对于多数致病菌来说具有一定的抑制作用。本研究从半滑舌鳎肠道中分离筛选出具有抑菌活性的乳酸菌,对菌株的生物学特性、抑菌能力以及抑菌物质的活性进行了深入研究,并对乳酸菌的抗氧化活性、还原性以及抗脂质过氧化能力进行探讨,以期在饲料的贮藏保存方面发挥作用,延长饲料的贮藏期。对乳酸杆菌生长特性研究中发现乳酸杆菌在p H 2~3和低浓度胆盐条件下均可生长。当胆盐浓度达到0.5%时,菌株的生长速率较正常条件降低40%左右。菌株发酵上清液分别经胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、蛋白酶K、胃蛋白酶处理后进行抑菌实验,经蛋白酶K处理后的上清液抑菌能力消失,表明上清液中的活性成分可以被蛋白酶K降解。采用牛津杯法从半滑舌鳎肠道中分离、筛选具有抑菌活性的乳酸菌,并对菌株进行鉴定,获得了三株乳酸杆菌CS1、CS2、CS4,选取革兰氏染色阴性菌:创伤弧菌、大肠杆菌、副溶血弧菌、霍乱弧菌、拟杆菌、嗜水气单胞菌、幽门螺旋杆菌,革兰氏染色阳性菌:维氏气单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、库氏链霉菌作为指示菌,对菌株的上清液抑制指示菌株进行检测。结果表明,发酵上清液对多数水产病害菌具有抑制能力,具有良好的抑菌效果。选取氨苄青霉素钠、氯霉素、硫酸卡那霉素以及硫酸链霉素进行药敏性实验,结果表明三株乳酸杆菌CS1、CS2、CS4都对氨苄青霉素钠和氯霉素敏感,对卡那霉素和硫酸链霉素则不敏感。菌株发酵上清液置于60℃、80℃、100℃条件下处理15 min后,抑菌物质热稳定性好;在对活性物质的分子量估算实验中,选用3K、10K、30K、50K和100K超滤管,选取副溶血弧菌、嗜水气单胞菌为指示菌,采用牛津杯法检测,证实具有抑菌能力的活性物质分子量在3 k Da-10 k Da之间。对乳酸杆菌菌悬液、离心后的上清液以及经超声处理后所得到的无细胞提取物的抗氧化能力及还原能力进行探究,实验结果表明乳酸杆菌的抗氧化及还原性物质主要存在于发酵上清液中。在饲料中添加乳酸杆菌和发酵上清液,相较未经处理的饲料,添加了乳酸杆菌和发酵上清液均可显著提高饲料的抗脂质过氧化能力。三株乳酸杆菌在水产动物养殖和饲料加工中具有一定的应用潜力。该论文有图14幅,表8个,参考文献106篇。
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