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目的： 观察温和灸肾俞穴对自然衰老大鼠衰老相关羰基化反应、细胞周期的影响，研究艾灸对衰老相关的两条信号通路P16/Rb、P19ARF/P53/P21CIP1关键信息分子的调控作用，从信号转导通路角度研究艾灸延缓衰老的分子机制。 方法： 采用健康雄性SD大鼠正常饲养95周制备自然衰老模型，SD大鼠按体重随机分为自然衰老组和艾灸组。艾灸组采用温和灸单侧“肾俞”穴，每日艾灸1次，两侧穴位交替使用，每次5min，每周干预6d，休息1d，共95周，自然衰老组不予干预，并以健康青年大鼠作为正常组用于对照。 采用Morris水迷宫实验观察大鼠空间记忆能力，采用比色技术检测大鼠肝组织羰基蛋白含量以及血清和肝组织SOD、MDA含量，应用流式细胞术检测大鼠肝组织细胞周期的变化，采用免疫组织化学技术检测大鼠肝组织P19ARF、P53、P21CiP1、P16蛋白的表达，应用荧光定量PCR技术检测大鼠肝组织P19ARF、P53、P21CiP1、RbmRNA的表达。 结果： 1、Morris水迷宫实验：与正常组比较，自然衰老组第2、3、5天逃避潜伏期均显著升高(P<0.05)：与自然衰老组比较，艾灸组第3、5天逃避潜伏期显著下降(P<0.05)。70s内穿越平台次数无统计学意义(P>0.05)：在第四象限活动时间没有统计学意义(P>0.05)。 2、SOD、MDA和羰基蛋白含量：与正常组比较，自然衰老组血清、肝脏SOD含量显著降低(P<0.05，P<0.01)；与自然衰老组比较，艾灸组血清、肝脏SOD含量升高(P<0.05)。与正常组比较，自然衰老组血清、肝脏MDA含量显著升高(P<0.05，P<0.01)；与自然衰老组比较，艾灸组血清MDA含量降低(P<0.05)。与正常组比较，自然衰老组羰基蛋白含量显著升高(P<0.01)；与自然衰老组比较，艾灸组羰基蛋白含量降低(P<0.05)。 3、肝脏细胞周期：与正常组比较，自然衰老组大鼠肝脏G0/G1期细胞比例明显升高(P<0.01)，PI指数降低(P<0.05)；与自然衰老组比较，艾灸组大鼠肝脏G0/G1期细胞比例降低(P<0.01)，PI指数升高(P<0.01)。 4、温和灸对自然衰老大鼠P19ARF/P53/P21CiPl信号通路的影响： 与正常组比较，自然衰老组P19AFmRNA及蛋白表达均显著升高(P<0.01)；与自然衰老组比较，艾灸组P19AFmRNA及蛋白表达均显著降低(P<0.01)；与正常组比较，自然衰老组P53mRNA及蛋白表达均升高(P<0.01，P<0.05)，与自然衰老组比较，艾灸组P53mRNA表达有所降低但无统计学差异(P>0.05)，P53蛋白表达降低(P<0.05)；与正常组比较，自然衰老组P21CIP1mRNA及蛋白均升高(P<0.01，P<0.05)，与自然衰老组比较，艾灸组P21CIP1mRNA及蛋白均降低(P<0.01，P<0.05)。 5、温和灸对自然衰老大鼠P16/Rb信号通路的影响 与正常组比较，自然衰老组P16蛋白表达增加(P<0.05)，与自然衰老组比较，艾灸组P16蛋白表达降低(P<0.05)；与正常组比较，自然衰老组RbmRNA显著降低(P<0.01)，与自然衰老组比较，艾灸组RbmRNA降低(P<0.05)。 结论： 1、艾灸“肾俞”穴对自然衰老大鼠空间记忆能力有一定的改善作用。 2、艾灸“肾俞”能够降低自然衰老大鼠肝组织羰基蛋白含量，提高肝组织和血清SOD含量，降低MDA含量。 3、艾灸“肾俞”穴可能通过降低自然衰老大鼠肝脏细胞G0/G1期细胞比例，升高PI指数调节细胞周期，以达到延缓衰老的作用。 4、艾灸“肾俞”穴能够下调P19ARF、P21CIP1蛋白及mRNA的表达，降低P53蛋白表达，调节P19ARF/P53/P21CIP1信号通路；下调P16蛋白表达、RbmRNA表达，调节P16/Rb信号通路。艾灸对Rb/P53信号通路的两条途径，P19ARF/P53/P21CIP1信号通路和P16/Rb信号通路均有一定的调节作用，该作用可能是艾灸“肾俞”穴延缓自然衰老的重要分子机制。