【摘 要】
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目的:LaminA/C在多种疾病的进程中发挥了重要的作用。然而,Lamin A/C与HBV感染未见报道。本研究旨在解析Lamin A/C在HBV复制与转录的作用。方法:（1）在HepG2细胞中,转染质粒HBx和HBV1.3,用HBx抗体免疫沉淀蛋白复合物,利用LC-MS筛选与HBx相互结合的蛋白;Co-IP 和 Western-Blot（WB）检测 HBx 和 Lamin A/C 相互作用;免疫荧
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目的:LaminA/C在多种疾病的进程中发挥了重要的作用。然而,Lamin A/C与HBV感染未见报道。本研究旨在解析Lamin A/C在HBV复制与转录的作用。方法:（1）在HepG2细胞中,转染质粒HBx和HBV1.3,用HBx抗体免疫沉淀蛋白复合物,利用LC-MS筛选与HBx相互结合的蛋白;Co-IP 和 Western-Blot（WB）检测 HBx 和 Lamin A/C 相互作用;免疫荧光技术检测HBx和Lamin A/C的共定位。（2）在HepG2细胞中,转染 pcDNA3.1,pcDNA3.1-HBV1.1,pcDNA3.1-HBV1.3,采用 WB 检测Lamin A/C的蛋白表达;同时,WB检测HepG2.2.15细胞中Lamin A/C的蛋白表达;在Huh7细胞中,转染HBx,WB检测Lamin A/C的磷酸化水平。（3）在HepG2.2.15和HBV感染的HepG2-NTCP细胞中敲减LaminA/C,在 HepG2-NTCP 细胞中过表达 Lamin A/C:WB 检测 HBV Core 水平;Real-time PCR（RT-PCR）检测 3.5kb RNA 的水平;Quantitative real-time PCR（qRT-PCR）检测 HBV 复制中间体和 HBV cccDNA 的表达水平。在HepG2.2.15细胞中,敲减SIRT1后,RT-PCR检测3.5kb RNA的水平,qRT-PCR检测HBV复制中间体。（4）在Huh7细胞中:过表达质粒SIRT1,Co-IP和WB检测Lamin A/C与SIRT1相互结合;敲减 LMNA 或 SIRT1 后,过表达 pGL-Xp、pGL-Cp、pGL-Sp1、pGL-Sp2,双荧光素报告基因实验检测四个启动子的活性;过表达pGL-Cp,ChIP-PCR检测LaminA/C与Cp序列的结合情况。（5）在Huh7细胞中,同时敲减Lamin A/C和过表达SIRT1、pGL-Cp后,双荧光素酶报告基因实验检测Cp启动子的活性。结果:HBx与Lamin A/C在细胞核内有结合。与对照组相比,转染了 HBV或HBx的细胞中Lamin A/C蛋白表达水平明显增高,且HBx抑制了 Lamin A/C在Ser392位点的磷酸化。敲减Lamin A/C后,HBV Core蛋白、HBV 3.5 kb RNA和HBV复制中间体的表达水平降低;过表达Lamin A/C后,HBV 3.5 kb RNA和HBV复制中间体的表达水平升高。Lamin A/C与SIRT1有相互作用,二者都可影响Cp启动子的活性。此外,敲减Lamin A/C,过表达SIRT1后Cp启动子活性升高的程度较对照组低。结论:我们的研究首次发现了 Lamin A/C可以和HBx相互作用。HBx能抑制Lamin A/C Ser392的磷酸化。Lamin A/C能够协同SIRT1调控HBV核心启动子的活性。
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第一部分骨骼肌FSTL1的表达及与糖代谢和胰岛素抵抗的关系目的:初步探索骨骼肌FSTL1的表达和与糖代谢和胰岛素抵抗的关系。方法:动物层面,通过PCR以及Western Blot的方法检测了12周龄C57BL/6J小鼠各个主要骨骼肌FSTL1表达情况;然后使用PCR以及Western Blot方法检测了C57BL/6J小鼠以及db/db小鼠、ob/ob小鼠、HFD造模小鼠骨骼肌FSTL1的m RN
研究目的1.观察SS31对后肢缺血小鼠骨骼肌结构与功能的影响。2.探索SS31对后肢缺血小鼠骨骼肌自噬与氧化应激的作用。3.探讨SS31能否通过AKT/mTOR通路激活自噬,缓解氧化损伤,保护C2C12肌管。研究方法1.体内实验:C57BL/6J雄性小鼠（14月龄,40只）采用股动脉结扎法建立后肢缺血（HLI）模型。SS31组的小鼠腹腔注射SS31（3mg/kg）4周。检测骨骼肌结构与功能（腓肠肌
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研究目的:癫痫患者有大约30%的患者在药物治疗过程中会转变成耐药性癫痫,加重患者的身心负担,使得耐药癫痫的防治变得尤为重要。转运体蛋白假说是耐药性癫痫最流行的假说之一,其中P糖蛋白是血脑屏障中的一种通道蛋白,把一些癫痫药物从脑组织输出到血管腔中起作用,导致脑组织较低的药物浓度,相应地降低药物本该有的效果。我们通过如下实验探究了P糖蛋白参与的耐药癫痫的发生机制与治疗措施。研究内容:在这项研究中,我们
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