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本试验建立了凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)体内血浆、肌肉和肝胰腺组织中甲砜霉素(thiamphenicol,THA)和氟甲砜霉素(florfenicol,FLR)的反相高效液相色谱(RP-HLCP)检测方法,比较研究了口灌给药条件下甲砜霉素和氟甲砜霉素在凡纳滨对虾体内的药物动力学,并初步研究了这两种药物在体外对主要几种药物代谢酶的影响。试验结果如下:25.0±1.0℃条件下,口灌给药(10mg/kg)条件下,在不同时间点分别采取凡纳滨对虾的血浆、肌肉和肝胰腺样品,用乙酸乙酯提取样品中的药物,60℃恒温水浴蒸干,流动相溶解,再用正己烷去脂,应用反相高相液相色谱法测定其中药物浓度。流动相为乙腈:水=16:84(V/V),紫外检测器的波长为225nm,流速为1mL/min,柱温为40℃,进样量为10μL,色谱柱为Zorbax SB-C18(5μm,150×4.6mm,I.D)。本试验方法样品回收率在78.13~92.83%之间,各样品日内变异系数(intra-day CV)小于4%,日间变异系数(inter-day CV)小于6.5%,最低检测限为(limit of detection,LOD)0.01μg/g,满足残留检测的需要。口灌给药后,甲砜霉素和氟甲砜霉素在凡纳滨对虾体内的血浆药时数据符合一级吸收二室开放模型。甲砜霉素在血浆中的主要药动学参数为:分布半衰期(t1/2α)、消除半衰期(t1/2β)、吸收半衰期(t1/2ka)分别为2.448h,10.659h和0.666h,药时曲线下面积(AUC)、达峰时间(Tmax)、达峰浓度(Cmax)分别为43.963μg/(mL·h),2h和7.956μg/mL。氟甲砜霉素在血浆中的主要药动学参数:分布半衰期(t1/2α)、消除半衰期(t1/2β)、吸收半衰期(t1/2ka)分别为1.364h,17.36h和1.069h,药时曲线下面积(AUC)、达峰时间(Tmax)、达峰浓度(Cmax)分别为43.963μg/(mL·h),2h和5.532μg/mL。建立了凡纳滨对虾的肝胰腺、鳃、胃和肌肉等组织中微粒体细胞色素P450(CYP450)酶系中主要药酶活性的检测方法,并对其在组织中的分布进行了比较研究。CYP1A选取7-乙氧基异吩唑酮脱氢酶(EROD)和7-乙氧基香豆素脱氢酶(ECOD)反应,CYP2E选取苯胺4-羟化酶(ANH)反应,CYP3A选取氨基比林N-脱甲基酶(AMND)和红霉素N-脱甲基酶(ERND)反应,通过测定其代谢产物生成量来反应酶活大小。测得的酶活性在上述组织中分布差异性类似,均表现为肝胰腺中最高,分别为EROD酶活为0.771±0.026nmol/(min·mg),ECOD酶活为0.457±0.017nmol/(min·mg),AMND酶活为2.391±0.014 nmol/(min·mg),ERND酶活为1.776±0.005 nmol/(min·mg),未检测到ANH酶的活性;其次为鳃和胃;肌肉中药酶活性最低,而且在其中没有检测到EROD和ECOD的活性。结果表明,对虾主要组织微粒体具有上述CYP450酶活性,且它们在对虾体内的分布和活性存在着组织和器官差异性。试验所建立的细胞色素P450酶系的检测方法灵敏、可靠,重复性好,为进一步研究水生动物药物代谢酶体外模型提供一定理论基础。对提取的各组织微粒体分别与甲砜霉素和氟甲砜霉素进行体外孵育反应后,测定各亚型药酶的酶活,研究药物对其酶活的影响。发现药物对AMND和ERND出现明显抑制,EROD和ECOD的酶活没有明显变化,没有检测到ANH酶活。肝胰腺微粒体与100μL 200μg/mL(终浓度10μg/mL)甲砜霉素孵育反应后,EROD、ECOD、AMND和ERND的酶活分别为0.769±0.016 nmol/(min·mg)、0.476±0.025 nmol/(min·mg)、1.948±0.073 nmol/(min·mg)和1.528+0.028 nmol/(min·mg);与100μL 200μ/mL(终浓度10μ/mL)氟甲砜霉素孵育反应后,EROD、ECOD、AMND和ERND的酶活分别为0.765±0.015 nmol/(min·mg)、0.449±0.035 nmol/(min·mg)、2.062±0.017 nmol/(min·mg)和1.506±0.023 nmol/(min·mg)。