【摘 要】
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[目的]旨在探讨KMT5A对垂体生长激素腺瘤的影响及其可能的分子作用机制,为筛选分子标志物及治疗靶点提供依据。[方法]1.收集昆明医科大学解剖教研室人正常垂体标本和昆明医科大学第一附属医院神经外一科垂体生长激素腺瘤术中标本,进行免疫组化实验分析KMT5A在两类组织中的表达差异。对Wistar大鼠正常垂体进行取材,培养GH3细胞,进行Q-PCR和Western blot实验分析KMT5A在大鼠正常垂
【基金项目】
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云南省“万人计划”青年拔尖人才专项； 云南省科技创新人才计划（2019HC084）；
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[目的]旨在探讨KMT5A对垂体生长激素腺瘤的影响及其可能的分子作用机制,为筛选分子标志物及治疗靶点提供依据。[方法]1.收集昆明医科大学解剖教研室人正常垂体标本和昆明医科大学第一附属医院神经外一科垂体生长激素腺瘤术中标本,进行免疫组化实验分析KMT5A在两类组织中的表达差异。对Wistar大鼠正常垂体进行取材,培养GH3细胞,进行Q-PCR和Western blot实验分析KMT5A在大鼠正常垂体和GH3细胞中的表达差异。2.构建敲低KMT5A的慢病毒载体,稳定转染GH3细胞,筛选出稳转细胞系并验证转染效果。采用CCK-8和克隆形成实验检测其对GH3细胞增殖的影响,FCM和WB实验检测其对GH3细胞周期和凋亡的影响。3.使用KMT5A的选择性抑制剂（UNC0379）干预GH3细胞,采用CCK-8、EdU和克隆形成实验检测其对GH3细胞增殖的影响,FCM和WB实验检测其对GH3细胞周期和凋亡的影响,明确KMT5A是垂体GH腺瘤中的一个潜在治疗靶点。4.裸鼠皮下成瘤实验验证敲低KMT5A或抑制剂UNC0379对垂体生长激素腺瘤的影响。Q-PCR和免疫组化实验检测KMT5A在体内的表达水平。5.初步探索KMT5A在体内外潜在的分子机制,WB检测β-catenin、TCF1及其靶蛋白c-Myc、Cyclin D1在垂体GH腺瘤中的表达情况。[结果]1.免疫组化结果表明KMT5A在人垂体生长激素腺瘤组织中呈高表达。Q-PCR和WB结果表明KMT5A在大鼠GH3细胞中呈高表达。2.CCK-8和克隆形成实验结果表明敲低KMT5A可以抑制GH3细胞增殖。FCM和WB结果表明敲低KMT5A可以通过下调Cyclin D1的表达水平来调节GH3的细胞周期,阻滞G0/G1期向S期过渡,并上调Cleaved-Caspase3的表达水平来促进细胞凋亡。3.CCK-8、EdU和克隆形成实验结果表明UNC0379也可以抑制GH3细胞增殖。FCM和WB结果表明UNC0379也可以影响GH3的细胞周期,阻滞G0/G1期向S期过渡,和促进细胞凋亡。4.移植瘤及肿瘤生长曲线表明敲低KMT5A或抑制剂UNC0379可以抑制垂体生长激素腺瘤的生长过程。Q-PCR和免疫组化结果表明敲低KMT5A或抑制剂UNC0379在垂体生长激素腺瘤中可以下调KMT5A的表达水平。5.WB检测KMT5A影响垂体生长激素腺瘤发生发展的潜在分子机制,即KMT5A影响β-catenin、TCF1及其靶蛋白c-Myc、Cyclin D1的表达水平,当敲低KMT5A或抑制剂UNC0379可导致β-catenin、TCF1及其靶蛋白c-Myc、Cyclin D1的表达水平降低。这提示Wnt/β-catenin信号通路可能参与了垂体生长激素腺瘤的发生发展过程,但仍需高质量研究进一步证实。[结论]KMT5A与垂体生长激素腺瘤的发生发展密切相关,它参与了垂体生长激素腺瘤的增殖、周期和凋亡过程。当敲低KMT5A可以抑制肿瘤增殖、阻滞细胞周期和促使细胞凋亡;同时,应用抑制剂UNC0379验证靶点,其结果与敲低KMT5A的实验结果相符,这提示KMT5A是垂体生长激素腺瘤一个潜在的分子标志物和治疗靶点。初步探索其分子机制,发现Wnt/β-catenin信号通路可能参与了垂体生长激素腺瘤的发生发展过程,但仍需高质量研究进一步证实。
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