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目的：从中医“肾主骨”理论入手,观察随着年龄增长成骨细胞RANKL、OPG mRNA表达的变化趋势,及健骨颗粒对成骨细胞RANKL、OPG mRNA表达的影响,探讨增龄在骨质疏松发病中的作用,以及健骨颗粒有效防治骨质疏松症的作用机理。方法：1、体外培养不同年龄大鼠成骨细胞：原代细胞用酶消化法分别从出生24小时、3月龄、6月龄、12月龄四个年龄组雌、雄SD大鼠颅盖骨取得,碱性磷酸酶染色鉴定系成骨细胞后,取第三代细胞进行实验。2、制备健骨颗粒含药血清：3月龄清洁级雄性SD大鼠20只,随机分为2组,每组10只,分别为健骨颗粒含药血清组和生理盐水血清组,前者给予健骨颗粒2g.kg-1·d-1,后者灌服生理盐水4m1·d-1,2组均连续灌胃7天,无菌取血制备健骨颗粒含药血清和生理盐水血清。3、检测指标：MTT法检测不同浓度健骨颗粒含药血清对成骨细胞增殖的影响,得出促成骨细胞增殖的最佳健骨颗粒含药血清浓度；分别以最佳浓度的含药血清和生理盐水血清作用于四个年龄组的成骨细胞48小时,提取细胞总RNA,逆转录得到cDNA,以cDNA为模板荧光定量PCR-SYBR GREEN法检测]RANKL、OPG mRNA的表达。结果：1、大鼠成骨细胞生长状况良好,改良Kaplow氏法碱性磷酸酶染色显示培养体系成骨细胞,纯度达90%以上。2、MTT法检测显示健骨颗粒含药血清浓度为20%时干预体外培养的成骨细胞增殖最快,与同浓度生理盐水血清组相比有统计学差异(P<0.05)3、成骨细胞RANKL mRNA的表达量随年龄增长而增加,而OPG mRNA的表达则正好相反。4、健骨颗粒含药血清干预后各年龄组RANKL mRNA表达量均较生理盐水血清组减少、同时OPG mRNA表达量增加。结论：1、本研究成功地培养了SD大鼠四个年龄组的成骨细胞,MTT检测显示健骨颗粒含药血清对成骨细胞有明显促增殖作用,以20%浓度促增殖能力最强。2、增龄对成骨细胞RANKL、OPG mRNA表达影响明显,RANKL mRNA的表达随年龄增长逐渐增加,而OPG mRNA则逐渐减少。3、健骨颗粒含药血清可以一定程度上改变成骨细胞RANKL、OPG mRNA表达随年龄增长而呈现的变化趋势,使RANKL mRNA表达降低,而OPG mRNA表达升高。影响RANKL/OPG mRNA的表达量,可能是补肾健脾中药健骨颗粒有效防治骨质疏松的机理之一。