苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis Berliner,简称Bt)是目前应用最广的一类微生物杀虫剂,在过去的30多年中得到广泛的研究和应用。Bt的主要杀虫活性与其携带的编码ICPs(Insecticidal Crystal Proteins,ICPs)的cry基因密切相关,因此,cry基因工程研究便成为近几年研究的热点。自Schnepf和Whiteley(1981)分离克隆了第一个Bt cry基因,到目前为止,国际上已经克隆了407种杀虫蛋白基因,但是随着Bt应用的不断扩大,Bt ICPs基因均在不同程度上引发了昆虫的抗性,寻找新的高毒力菌株及基因是解决昆虫抗性问题的有效途径之一。本研究利用PCR-RFLP法对苏云金芽孢杆菌新菌株S249的cry1型基因进行鉴定,结果显示其含有cry1Aa/cry1Ag、cry1Ab、cry1B基因,并根据GenBank中cry1Ab型基因序列设计引物对P-1,从苏云金芽孢杆菌S249中扩增得到cry1Ab的全长基因,克隆到pGEM-T Easy载体上。通过引物步行法测定该基因长3633bp,其中开放阅读框(ORF)长3468bp,编码1155个氨基酸;经ExPASy分析,初步预测其蛋白质分子量为130.7kDa,等电点pI 5.04。序列比较结果表明,该基因与其它cry1Ab基因存在6~58个氨基酸的差异,已在GenBank中登录,登录号为EU220269,并被Bt毒素基因国际命名委员会正式命名为cry1Ab22。将cry1Ab22基因克隆到表达载体pMAL-c2X上,得到重组质粒pM1a,然后转化到大肠杆菌TB1中,利用IPTG诱导进行表达,最佳IPTG诱导浓度为0.5mM,最佳诱导时间为4h,目的蛋白约占总蛋白的17%。经SDS-PAGE检测,发现转化菌株TB1能正确表达约170kDa的融合蛋白。对表达的cry1Ab22蛋白进行生物测定,结果表明,cry1Ab22蛋白对小菜蛾(Plutella xylostella)的LC50为225.1μg/ml。新cry基因的克隆,不但为cry基因家族增添了新成员,而且为构建新型转基因工程菌和转基因植物,提供了基因材料。