禽流感是危害我国养禽业的主要疾病之一，禽流感病毒亚型众多，变异频繁，难以防控。为研究新型禽流感疫苗，本研究建立了H9亚型禽流感病毒反向遗传学操作系统并拯救出适合疫苗生产的禽流感H9亚型重组病毒。该研究利用反向遗传操作技术，采用H1N1亚型禽流感病毒的6个基因片段（PB2、PB1、PA、M、NP和NS）和H9N2亚型山东分离株的2个基因（NA和HA）为基因供体片段，分别与pMD18-T载体连接转化后，经蓝白斑筛选，选取阳性克隆与PHW2000载体连接转化，构建与H9N2亚型分离株具有相同基因组合方式的病毒。将含H1N1流感病毒6个基因的阳性质粒(PHW2000-PB2、PHW2000-PB1、PHW2000-PA、PHW2000-M、PHW2000-NP和PHW2000-NS)与含H9N2流感病毒分离株HA、NA基因的质粒PHW-HA和PHW-NA按质量比1∶1的比例混合均匀，共转染293T和VERO混养细胞，研究该重组病毒在293T和VERO细胞上的生长特性。通过鸡胚传代和细胞传代后进行血凝实验和血凝抑制试验，以对其安全性、稳定性、免疫原性进行初步评价。该研究结果成功拯救出了具有较高效价的H9N2亚型弱毒株，表明其具有良好的遗传稳定性，该重配病毒可以作为疫苗候选株使用。H9亚型禽流感病毒反向遗传操作系统的成功建立为研究禽流感病毒基因功能、病毒致病机理以及传播机制奠定了基础；重组禽流感病毒株的拯救为H9亚型禽流感疫苗的研制开辟了新的途径。