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目的研究金雀异黄素（Genistein,Gen）对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞损伤的保护作用,并探讨其分子机制,从而为阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）的防治提供实验依据。方法体外培养神经细胞系SH-SY5Y,用不同浓度Gen（050μmol/L）处理1.5h,随后加入20μmol/L Aβ25-35处理细胞024h,MTT检测细胞增殖情况;Realtime-PCR检测HO-1 mRNA表达,Western blot检测其蛋白表达,比色法分析HO-1酶活性改变;不同浓度放线菌素D（ActD）和放线菌酮（CHX）处理SH-SY5Y细胞1h后,分别加入上述Gen和Aβ25-35处理,Western blot检测HO-1蛋白表达,从而评估HO-1的表达变化情况;同时提取处理后的总蛋白及核蛋白,采用Western blot分别检测PI3K/Akt的磷酸化以及转录因子NF-E2相关因子2（NF-E2-related factor 2,Nrf2）在细胞核及胞浆中的表达情况,并采用PI3K抑制剂LY294002处理,或采用siRNA干扰Nrf2表达,探讨HO-1表达是否受PI3K/Akt或Nrf2调控;同时采用HO-1激动剂CoPP或抑制剂ZnPP处理细胞,MTT检测细胞活性的变化,以证实HO-1能否发挥对SH-SY5Y细胞的保护作用。结果1.050μmol/L Gen的处理SH-SY5Y细胞后,MTT结果显示,在此浓度范围内Gen不影响细胞活力。而20μmol/L Aβ25-35处理细胞24h后可明显降低细胞活力。当首先用050μmol/L Gen预处理1.5h后Aβ25-35的细胞毒性显著降低。2.实时荧光定量PCR结果显示,阴性对照组中HO-1 mRNA表达水平很低。Aβ25-35处理后HO-1 mRNA有轻微增加。而同时给予不同浓度Gen处理后,HO-1 mRNA的表达随着Gen浓度增加而增加。HO-1蛋白表达与实时定量PCR结果类似。Act D和CHX预处理SH-SY5Y细胞后,HO-1表达显著减少。此外,正常SH-SY5Y细胞中HO-1酶活性较低。Aβ25-35处理后,其活性有轻微增高,而同时给予Gen干预后,HO-1的酶活性随着Gen浓度的增加而增强。3.阴性对照组SH-SY5Y细胞中PI3K p85α亚基磷酸化水平较低,而Aβ25-35刺激后,磷酸化p85α亚基有所增多。给予不同浓度Gen处理后,p85α的磷酸化水平进一步增加,而细胞内总p85α水平无明显影响。Gen处理前给予20μmol/L PI3K抑制剂LY294002预处理30min后,HO-1表达水平受到抑制。4.50μmol/L Gen处理SH-SY5Y细胞0120min,随着处理时间的延长,细胞浆中Nrf2的表达水平逐渐减少。相比之下,胞核中Nrf2的含量逐渐升高。采用Nrf2 siRNA沉默其表达后,HO-1表达明显减少。5.用10μmol/L HO-1抑制剂ZnPP或10μmol/L激动剂CoPP处理SH-SY5Y细胞后,结果发现ZnPP处理后可明显消除Gen对SH-SY5Y细胞毒性的保护作用,而CoPP处理后结果与Gen类似。结论1.金雀异黄素可拮抗Aβ25-35对SH-SY5Y细胞的毒性作用;2.金雀异黄素拮抗Aβ25-35的毒性作用可能与激活PI3K/Akt和Nrf2、诱导HO-1表达有关。