【摘 要】
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目的: 构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与 SARS 冠状病毒不同长度核衣壳蛋白区段融合表达的 pEGFP-C1 重组载体,对 293 细胞进行瞬时转染,显微镜下观察核衣壳蛋白不同区段在细
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目的: 构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与 SARS 冠状病毒不同长度核衣壳蛋白区段融合表达的 pEGFP-C1 重组载体,对 293 细胞进行瞬时转染,显微镜下观察核衣壳蛋白不同区段在细胞内的定位;构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)与 SARS 冠状病毒(SARS-CoV)各结构蛋白的融合表达载体以及各结构基因的短发夹状 RNA(shRNA)表达载体,将两种重组载体共转染 293 细胞后观察 shRNA 对 SARS 冠状病毒结构蛋白表达的影响。 方法: 首先用两种蛋白分析软件 Prosite 和 PredictNLS server (prediction and analysis of nuclear localization signals , Columbia University Bioinformatics Center)分析 SARS 冠状病毒核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N 蛋白)序列,找出其中的核定位信号(nuclear localization signals, NLS)序列。 PCR 扩增或人工合成 SARS 冠状病毒不同长度核衣壳蛋白基因片段,分别与载体 pEGFP-C1 连接,得到不同长度 N 蛋白的重组表达载体。 将重组的 pEGFP-C1 载体转染 293 细胞,分别在荧光显微镜和激光共聚焦显微镜下观察不同长度核衣壳蛋白在细胞内的定位。同时,将带有 N 基因全长的重组 pcDNA-3.1(-)载体转染 293 细胞,应用免疫
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