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目的:为了研究骨骼肌发育相关基因在不同发育时期绵羊胎儿半腱肌和背最长肌中的表达规律以及各因子之间的相关性与相互调控关系。方法:本试验采取妊娠30 d(E30)、50 d(E50)和70 d(E70)3个时期绵羊胎儿的半腱肌和背最长肌,用HE染色法观察了其显微结构,用免疫组织化学检测了MyoD、MyoG、Myomaker和GR蛋白的表达与定位,用实时荧光定量PCR和Western Blot法检测了MyoD、MyoG、Myf5、Myf6、Pax3、Pax7、Myomaker、Myostatin和GR的m RNA和蛋白水平表达,并通过皮尔森相关系数法分析了成肌相关基因表达水平间的相关性,通过生物信息学分析预测了绵羊骨骼肌发育相关基因的5’区调控元件及位点。结果:(1)HE染色结果显示,随着绵羊胎龄E30~E70的逐渐增大,半腱肌和背最长肌肌纤维的数量和横截面积也逐渐增大,同一时期背最长肌的增长幅度相对较大;免疫组织化学结果显示,MyoD、MyoG和GR蛋白表达定位于细胞核上,而Myomaker蛋白表达定位于细胞膜上。(2)Western Blot和实时荧光定量PCR结果显示,MyoD、MyoG、Myf5、Myf6、Pax3、Pax7、Myomaker、Myostatin和GR均与绵羊胎儿骨骼肌的发育密切相关,在半腱肌和背最长肌E30、E50和E70不同发育时期中,MyoD在两种组织均呈现先下降后上升的趋势;MyoG在半腱肌呈现先下降后上升趋势,而在背最长肌中呈现持续上升趋势;Myf5表达量随发育阶段均呈逐渐上升趋势;Myf6在两种组织均呈现先上升后下降的趋势;Pax3与Pax7表达量随发育阶段均呈逐渐下降趋势;Myomaker在两种组织的表达均呈现出先上升后下降的峰值模式;Myostatin在半腱肌呈现持续上升趋势,而在背最长肌中呈现先下降后上升趋势;GR在E30、E50和E70均存在表达且表达量随发育阶段均呈持续上升趋势。(3)半腱肌各因子蛋白表达量的相关性分析结果显示,MyoD与MyoG和Myostatin,Pax7与Pax3和Myostatin,Myostatin与GR蛋白表达呈正相关;Pax3与Myf5、Myf6、Myostatin和GR,Myomaker与MyoD和MyoG蛋白表达呈负相关。(4)半腱肌各因子m RNA表达量的相关性分析结果显示,MyoD与MyoG、Myf5和GR,MyoG与Myf5、Myf6、Myostatin和GR,Myomaker与MyoG、Myf6和Pax7,Myostatin与Myf5、Myf6、GR和Pax3 m RNA表达呈正相关;MyoG与Pax7,Pax7与Myf5和Myostatin,Myomaker与MyoD m RNA表达呈负相关。(5)背最长肌各因子蛋白表达量相关性分析结果显示,MyoG与GR,Myf5与Myf6和Myomaker,Pax7与Pax3蛋白表达呈正相关;MyoD与Myf6和Myomaker、Myf5与MyoG、Pax7和GR,Pax3与GR蛋白表达呈负相关;(6)背最长肌各因子m RNA表达量的相关性分析结果显示,MyoD、MyoG、Myf5和GR彼此之间,Myf6与Myomaker,Pax3与Pax7和Myostatin,GR与Myostatin和Myf6m RNA表达呈正相关;MyoD与Myf6和Myomaker,MyoG与Pax3和Pax7,Myf5与Pax3和Pax7,Pax3与GR,Pax7与Myomaker m RNA表达呈负相关。(7)半腱肌成肌相关转录因子蛋白与靶基因m RNA表达量的相关性分析结果显示,MyoD蛋白与Pax3、Pax7和Myomaker m RNA,MyoG蛋白与Myomaker m RNA,Myf5蛋白与GR m RNA,Myf6蛋白与Myostatin m RNA,Pax3蛋白与Pax7 m RNA,Pax7蛋白与Pax3 m RNA,GR蛋白与Myf5 m RNA呈正相关;MyoD蛋白与MyoD和MyoG m RNA,MyoG蛋白与MyoG m RNA,Myf5蛋白与Pax3和Pax7 m RNA,Pax3蛋白与Myf5和GR m RNA,GR蛋白与Pax3和Pax7 m RNA呈负相关;(8)背最长肌成肌相关转录因子蛋白与靶基因m RNA表达量的相关性分析结果显示,MyoG蛋白与MyoD和Myf5 m RNA,Myf5蛋白与MyoG和GR m RNA,Myf6蛋白与Myomaker m RNA,Pax3蛋白与Myf6和Pax7 m RNA,Pax7蛋白与Myf6和Pax3 m RNA,GR蛋白与MyoD、MyoG和Myf5m RNA均呈正相关;MyoD蛋白与Myf6和Myomaker m RNA,MyoG蛋白与GR m RNA,Myf5蛋白与Pax3和Pax7 m RNA,Myf6蛋白与MyoD m RNA,Pax3蛋白与MyoD、MyoG、和Myf5 m RNA,Pax3蛋白与GR m RNA,Pax7蛋白与GR m RNA,GR蛋白与Pax3和Pax7 m RNA均呈负相关。(9)生物信息学分析预测到绵羊骨骼肌发育相关基因5’调控区存在MYOD、GRE、n GRE、PAX3和PAX7部分或全部调控元件。结论:绵羊胚胎期E30~E70阶段中背最长肌的发育比半腱肌快;在绵羊不同胚胎期半腱肌和背最长肌组织中骨骼肌发育相关基因的表达呈现相似但有所不同的表达规律,且多数基因之间存在相关性;各基因之间的部分调控机制可能是通过转录因子与其在靶基因上的相应元件如MYOD、GRE、n GRE、PAX3和PAX7结合而介导的直接或间接调控作用。