鸭甲型肝炎病毒(DHAV)可引起雏鸭发生急性、高度致死性传染病。主要感染3周龄以下的雏鸭,其中1周龄以内的雏鸭死亡率高达95%,主要特征病变为患病鸭的肝脏肿大和出血。本试验开展了DHAV病毒单克隆抗体及胶体金试纸条制备和快速诊断等研究,结果如下：1.DHAV单克隆抗体的制备及初步鉴定用血清1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV-1) X株病毒尿囊液接种鸭胚,收集24-72h死亡的鸭胚尿囊液,将含DHAV-1病毒的尿囊液与等量的氯仿混合,抽提3次,除去脂类以及一些杂蛋白,然后在40000 r/min离心2 h,用PBS重悬病毒并使病毒蛋白含量为0.5 mg/mL,作为制备单克隆抗体的抗原免疫6周龄的BALB/c雌性小鼠。取免疫后小鼠的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤进行了细胞融合、筛选,再用有限稀释法对杂交瘤细胞进行3次亚克隆,最终得到5株可以稳定分泌特异性抗体的阳性杂交瘤细胞,分别命名为1#、2#、3#、4#}和5#杂交瘤细胞株。经鉴定,1#单克隆抗体类型属于IgM,2#单克隆抗体类型属于IgG1,3#单克隆抗体类型属于IgG2b,4#和5#单克隆抗体类型属于IgG2a。纯化后单抗腹水的效价均在2×105以上;5株杂交瘤细胞株稳定性均较好,经过体外传代以及细胞冻存复苏仍能稳定分泌抗体。5株单克隆抗体的相对亲和常数都在109数量级以上,具有较好的抗原结合能力,其中3#单克隆抗体的亲和力更高。2.胶体金试纸条的研制及应用用纯化的2#单克隆抗体进行胶体金标记制备成金标抗体,经过试验条件的优化,确定了胶体金与抗原的最佳标记量为34μg/mL,最佳标记的pH值确定0.1mol/L K2CO3加入量为12μL/mL;将纯化的兔抗DHAV-1多抗包被于NC膜的T线上作为检测线,羊抗鼠IgG包被于NC膜的C线上作为对照线,制成双抗体夹心法检测DHAV的胶体金免疫层析试纸条。对胶体金试纸条T线和C线浓度的优化,确定检测线上的兔抗DHAV-1多抗的最佳标记量为1 mg/mL,对照线上羊抗鼠IgG最佳标记量为1 mg/mL。在特异性试验中,检测4株DHAV-1和6株DHAV-3呈阳性反应,对鸭常见的其它致病病原(鸭瘟病毒、鸭大肠杆菌、鸭坦布苏病毒、鸭沙门氏菌、鸭疫里默氏杆菌等)检测均为阴性；对DHAV-1最低检出量为0.9μg, DHAV-3最低检出量为1.8 μg。试纸条在4℃、室温和37℃至少可以保存3个月；批间和批内试纸条对样品检测的重复性较好。本试验制备的试纸条与RT-PCR同时检测临床样本的阳性符合率为96.5%(111/115),阴性符合率为97.9%(46/47)。该胶体金试纸条具有较好灵敏度、特异性、重复性和稳定性。