【摘 要】
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精子经附睾头和附睾体转运后进一步成熟,在附睾尾中储存。在附睾尾管腔中储存期间,自由基产生和抗氧化系统的失衡会导致氧化应激,从而影响精子结构、存活率及受精率。本研究选取179只在同一环境中饲养至6月龄的湖羊公羔,根据附睾重、精子密度、精子顶体完整性和组织形态分为低繁殖力组（L）和高繁殖力组（H）。利用气相色谱法、q RT-PCR、western blot以及免疫组化等技术分析不同繁殖力湖羊附睾尾脂肪
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精子经附睾头和附睾体转运后进一步成熟,在附睾尾中储存。在附睾尾管腔中储存期间,自由基产生和抗氧化系统的失衡会导致氧化应激,从而影响精子结构、存活率及受精率。本研究选取179只在同一环境中饲养至6月龄的湖羊公羔,根据附睾重、精子密度、精子顶体完整性和组织形态分为低繁殖力组（L）和高繁殖力组（H）。利用气相色谱法、q RT-PCR、western blot以及免疫组化等技术分析不同繁殖力湖羊附睾尾脂肪酸组成及抗氧化能力,然后通过RNA-Seq技术筛选调控附睾尾脂质代谢及抗氧化相关的关键基因,结果如下:（1）179只6月龄湖羊的附睾重与睾丸重、体重、精子密度显著正相关。根据附睾重、精子密度、顶体完整率和附睾尾组织形态,选取H组和L组各9只进行分析,H组附睾管直径、精子密度显著高于L组（P＜0.05）。（2）脂肪酸研究发现H组附睾尾的粗脂肪、总脂肪酸、总n-3 PUFA和DHA含量显著高于L组（P＜0.05）,n-6/n-3 PUFA比值显著低于L组（P＜0.05）。免疫组化显示SREBP1和ELOVL2在附睾管的假复层柱状纤毛上皮以及管周平滑肌细胞中均有表达。H组SREBP1的m RNA表达（P=0.09）上调,ELOVL2在m RNA水平显著升高（P＜0.05）,蛋白表达量呈现上调的趋势。（3）抗氧化能力研究发现,与L组相比,H组具有更高的抗氧化能力,其GSH-Px、T-AOC显著增加（P＜0.05）,MDA、附睾上皮细胞和管腔精子ROS的平均光密度值、线粒体拷贝数均显著降低（P＜0.05）。免疫组化显示GPX5、GPX3、GPX4、SOD在附睾尾广泛表达,且在H组的表达强度显著高于L组（P＜0.05）,GPX5、GPX3的m RNA表达在H组显著上调（P＜0.05）。（4）RNA测序共发现1404个DEGs,与L组相比,H组有735个上调,669个下调。通过GO富集分析筛选到参与脂质代谢和抗氧化的基因,KEGG富集到与脂质代谢和抗氧化活性相关的通路,筛选到CYCS、COX6A1、ERO1LB、SMOX、GPX3、GPX5、GPX7、CYP4V2、ALDH3A2等与脂质代谢和抗氧化相关的关键基因。综上,与低繁殖力组相比,高繁殖力组附睾尾n-3 PUFA含量较高,ROS水平较低,抗氧化能力较强,以保护精子免受ROS的侵害,CYCS、COX6A1、ERO1LB、SMOX、GPX3、GPX5、GPX7、CYP4V2和ALDH3A2等关键基因可能参与湖羊附睾组织脂质代谢和抗氧化能力的调控。
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