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现代药理研究表明，红景天苷及其苷元酪醇为红景天的主要有效成分。红景天苷在生物体内又会产生苷元代谢产物酪醇。红景天及活性成分在抗疲劳、抗氧化、保护心血管、肝肾功能及抗癌、抗抑郁方面均有很好的功效，有增强自身机体机能并提高免疫力等作用。本课题研究分三个阶段，分别对比格犬血浆中可能存在的代谢物进行鉴定，对红景天苷绝对生物利用度考察，以及红景天苷和酪醇在比格犬体内药动学研究。
第一阶段，本试验采用高效液相色谱联用高分辨质谱(LC-HRMS)法，对重复7天给予15mg/kg红景天苷后的血浆样品进行了代谢产物鉴定，推测红景天苷在犬血浆中的代谢途径。
第二阶段，建立比格犬血浆中的红景天苷的HPLC-MS/MS测定方法，研究红景天苷在比格犬体内的绝对生物利用度。以天麻素为内标，血浆样品经蛋白沉淀后，经SymmetryRP18(100mm×4.6mm,3.5μm)柱分离，使用体积分数0.1%甲酸溶液(A)-含0.1%甲酸和20%乙腈的甲醇溶液(B)溶液作为流动相，进行等度洗脱(35%B)，流速为0.4ml/min，柱温40℃，进样量2μl；通过电喷雾电离源(ESI),以多反应监测(MRM)模式进行负离子检测，红景天苷、天麻素的MRM离子对分别为m/z299.1→118.9、m/z285.1→122.9。比格犬分别以口服和静注两种给药方式给予红景天苷，在不同时间点取血，样品采用HPLC-MS/MS法测定，研究红景天苷的药动学及绝对生物利用度。红景天苷的质量浓度在10～10000ng/ml内线性关系良好(r＞0.9986)。单剂量口服15mg/kg或静注1.5mg/kg红景天苷后，测得红景天苷在比格犬体内的绝对生物利用度为(44.1±10.9)%。
第三阶段，考察了红景天苷及其主要代谢物酪醇在比格犬中药代动力学。以天麻素为内标，血浆样品经氯仿、苯酚和异戊醇混合试剂萃取后，通过Shimadzu(R)Shim-packVeloxPFPP色谱柱(100mm×2.1mm,1.8μm)进行分离，使用水(A)-乙腈∶甲醇(20∶80，v∶v)(B)溶液作为流动相，进行梯度洗脱，流速为0.3ml/min，柱温40℃，进样量2μl；通过电喷雾电离源(ESI)，以多反应监测(MRM)模式进行负离子检测，红景天苷、酪醇、天麻素的MRM离子对分别为m/z299.1→118.9、137.0→105.9、m/z285.1→123.0。比格犬血浆中红景天苷在10～10000ng/ml浓度内，酪醇在1～1000ng/ml浓度内线性关系良好(r＞0.99)，定量下限分别为10ng/ml和1ng/ml。此方法灵敏度高，操作简便，并应用于红景天苷和酪醇体内药动学研究。
本研究的结果表明：血浆样品中仅检测到红景天苷和代谢产物酪醇，说明红景天苷原型药物是血浆中的主要暴露形式，红景天苷在比格犬血浆中主要通过O-脱烷基进行代谢。建立了LC-MS/MS法测定比格犬血浆中红景天苷的方法，并应用于红景天苷绝对生物利用度研究。为进一步研究红景天苷主要代谢物酪醇的体内药动学，优化并建立了高灵敏度LC-MS/MS法同时测定比格犬血浆中红景天苷和酪醇的方法。所建方法中，样品前处理操作简单快速，能够满足生物分析最新法规的要求，并应用于比格犬体内红景天苷及其主要代谢物酪醇的药代动力学研究，为后续的临床人体药动学研究提供有利的依据。
第一阶段，本试验采用高效液相色谱联用高分辨质谱(LC-HRMS)法，对重复7天给予15mg/kg红景天苷后的血浆样品进行了代谢产物鉴定，推测红景天苷在犬血浆中的代谢途径。
第二阶段，建立比格犬血浆中的红景天苷的HPLC-MS/MS测定方法，研究红景天苷在比格犬体内的绝对生物利用度。以天麻素为内标，血浆样品经蛋白沉淀后，经SymmetryRP18(100mm×4.6mm,3.5μm)柱分离，使用体积分数0.1%甲酸溶液(A)-含0.1%甲酸和20%乙腈的甲醇溶液(B)溶液作为流动相，进行等度洗脱(35%B)，流速为0.4ml/min，柱温40℃，进样量2μl；通过电喷雾电离源(ESI),以多反应监测(MRM)模式进行负离子检测，红景天苷、天麻素的MRM离子对分别为m/z299.1→118.9、m/z285.1→122.9。比格犬分别以口服和静注两种给药方式给予红景天苷，在不同时间点取血，样品采用HPLC-MS/MS法测定，研究红景天苷的药动学及绝对生物利用度。红景天苷的质量浓度在10～10000ng/ml内线性关系良好(r＞0.9986)。单剂量口服15mg/kg或静注1.5mg/kg红景天苷后，测得红景天苷在比格犬体内的绝对生物利用度为(44.1±10.9)%。
第三阶段，考察了红景天苷及其主要代谢物酪醇在比格犬中药代动力学。以天麻素为内标，血浆样品经氯仿、苯酚和异戊醇混合试剂萃取后，通过Shimadzu(R)Shim-packVeloxPFPP色谱柱(100mm×2.1mm,1.8μm)进行分离，使用水(A)-乙腈∶甲醇(20∶80，v∶v)(B)溶液作为流动相，进行梯度洗脱，流速为0.3ml/min，柱温40℃，进样量2μl；通过电喷雾电离源(ESI)，以多反应监测(MRM)模式进行负离子检测，红景天苷、酪醇、天麻素的MRM离子对分别为m/z299.1→118.9、137.0→105.9、m/z285.1→123.0。比格犬血浆中红景天苷在10～10000ng/ml浓度内，酪醇在1～1000ng/ml浓度内线性关系良好(r＞0.99)，定量下限分别为10ng/ml和1ng/ml。此方法灵敏度高，操作简便，并应用于红景天苷和酪醇体内药动学研究。
本研究的结果表明：血浆样品中仅检测到红景天苷和代谢产物酪醇，说明红景天苷原型药物是血浆中的主要暴露形式，红景天苷在比格犬血浆中主要通过O-脱烷基进行代谢。建立了LC-MS/MS法测定比格犬血浆中红景天苷的方法，并应用于红景天苷绝对生物利用度研究。为进一步研究红景天苷主要代谢物酪醇的体内药动学，优化并建立了高灵敏度LC-MS/MS法同时测定比格犬血浆中红景天苷和酪醇的方法。所建方法中，样品前处理操作简单快速，能够满足生物分析最新法规的要求，并应用于比格犬体内红景天苷及其主要代谢物酪醇的药代动力学研究，为后续的临床人体药动学研究提供有利的依据。