【摘 要】
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本研究以41个红花檵木品种(品系)为实验材料,利用改良CTAB法提取基因组DNA,建立了ISSR-PCR扩增的最佳反应体系;利用ISSR标记技术,构建了不同品种(品系)的指纹图谱。主要研究
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本研究以41个红花檵木品种(品系)为实验材料,利用改良CTAB法提取基因组DNA,建立了ISSR-PCR扩增的最佳反应体系;利用ISSR标记技术,构建了不同品种(品系)的指纹图谱。主要研究结果如下:在单因素设计的基础上,得出了红花檵木ISSR最佳反应体系,即20μL的反应体系:DNA模板50ng,引物0.5μmol/L,Taq酶1U,dNTP0.24mmol/L,1×PCR buffer,Mgcl21.5mmol/L;ISSR-PCR程序为:预变性94℃3min,变性94℃45s,退火51℃-57℃1min,72℃1.5min共35个循环,72℃总延伸5min后终止反应,于4℃保存。从60个引物中,筛选出14个引物用于品种(品系)的遗传多样性检测和指纹图谱构建。14个引物共扩增出203条带,其中多态性带为148,多态性带的比例为72.9%。41份材料之间的遗传相似范围在0.626-0.926之间,平均值为0.75。用NTSYS-pc(2.10e版)软件进行UPGMA聚类分析,获得聚类树形图。以0.72为阈值可以将41份品种(品系)划分为2个类群;以0.74为阈值可划分为5个类群。聚类结果与侯伯鑫先生的形态分类系统中的3大类分类相吻合,同时也反映出红花檵木品种(品系)类型的演变与发展,传统品种(品系)与新育成的品种(品系)有分别聚类的趋势,其中出现了大类之间的过渡类型。随着GS值增大,聚类的趋势与红花檵木表型分类不完全一致。引物ISSR62对41个红花檵木品种(品系)进行扩增,均获得了带型丰富且清晰可辨的DNA指纹图谱。引物ISSR23、ISSR62能将41个品种(品系)完全分开。
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