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淀粉不仅是人类的能量来源,而且是重要的工业原料,马铃薯(Solanum tuberosum L.)淀粉以其特有的物理和化学性质成为了不可替代工业原料,尽管我国是最大的马铃薯生产国,但与发达国家相比,我国马铃薯产业发展水平较落后,其重要的原因之一是马铃薯淀粉加工品质低下,生产效率不高。
由于马铃薯无性繁殖和多倍体的特性,故常规育种方法的目的基因极其匿乏,育种难度大,所以近十年国内马铃薯育种以引种为主,引进品种由于存在自然和生产条件的不适应,无法解决淀粉加工品质和生产效率低下的问题,为此,研究马铃薯淀粉生物合成途径、发现、识别和应用品质改良基因,创新种质,是解决产业发展存在问题的根本途径。
研究表明,植物淀粉分支酶(SBE)以ADP-葡萄糖和20-40个葡萄糖苷链为底物代谢α-1,6糖苷键的合成,形成支链淀粉的分支糖苷键,细菌糖原分支酶(GBE)以5-16个葡萄糖苷链为底物催化糖原分子中α-1,6糖苷键的合成;在多糖分子中GBE催化合成的α-1,6糖苷键密度高于SBE,淀粉中分支越多,其粘度越高,品质也越佳。
本研究通过PCR扩增,分离获得了大肠杆菌糖原分支酶编码基因g1gB,经酶切分析和测序证实后,研究了在大肠杆菌内表达,用根癌农杆菌介导的途径,将g1gB转化马铃薯体内表达,为增加马铃薯淀粉和支链淀粉合成,提高淀粉粘度,也为最终实现马铃薯淀粉品质改良提供创新种质、进一步研究淀粉生物合成奠定基础。
本研究获得以下结果:(1)与GenBank已发表的序列比较发现由分离获得的g1gB(AEO16768)编码多肽有6个氨基酸发生突变;(2)构建了由T7启动子驱动的g1gB原核表达载体,原核表达结果表明,g1gB表达产生的GBE和糖原高于对照组;(3)建立了本实验室条件下的根癌农杆菌介导马铃薯基因转化方法,转化时间为3-4个月;(4)构建了35S启动子驱动的高支链淀粉g1gB植物表达载体pC-gB;(5)获得了转g1gB马铃薯14株,为进一步的筛选获得高加工品质马铃薯奠定了基础。