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目的:由于常用于血友病A(Hemophilia A,HA)间接基因诊断的多态位点对HA家系的诊断率有限,本研究通过对FⅧ基因内5个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点的杂合度进行分析,以寻找新的可用于HA家系基因诊断的多态位点。方法:收集16个无血缘关系的HA家系成员及3例家系不全的HA患者血样用于家系连锁分析及基因诊断;50例汉族正常女性血样用于5个SNP位点的多态性分析。采用血浆凝固法(一期法)进行凝血因子Ⅷ活性(FVIII:C)检测。对重型患者采用长距离PCR(LD-PCR)检测FⅧ基因内含子22倒位;双管多重PCR扩增技术检测内含子1倒位。通过连锁分析的方法将常用的Bcl I、HindⅢ和Stl4(DXS52)3个多态位点用于HA家系的间接基因诊断,其中Bcl I及HindⅢ位点采用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(Polymerase Chain Reaction-Restrict Fragment Length Polymorphism,PCR-RFLP)方法进行分析,Stl4(DXS52)位点采用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)进行产物分析。选取FⅧ基因内在亚洲人群中杂合度较高且多态位点只具有二等位基因的5个SNP位点(rs1509787、rs1800291、rs3861554、rs1470586、rs6649625),运用RFLP方法对50例汉族正常女性的这5个位点进行检测,把杂合度较高的SNP位点用于HA家系的间接基因诊断。结果:(1)根据FVIII:C活性检测结果,19例先证者中有4例为重型(FVIII:C活性<1%),10例为中型(FVIII:C活性:1%-5%),5例为轻型(FVIII:C活性:5%-25%)。(2)4例重型HA患者中有1例为内含子22倒位,检出率为25%(1/4),未检出内含子1倒位。(3)联合应用Bcl I、Stl4(DXS52)2个位点作连锁分析,可对16个家系中6个家系进行间接基因诊断,家系的诊断率为37.5%(6/16),其中有2个家系可以用Bcl I位点提供诊断信息,4个家系可以用Stl4(DXS52)位点提供诊断信息。(4)5个FVIII基因内SNP位点在所研究的人群中有3个位点具有多态性,即rs1509787、rs3861554和rs1470586,杂合子频率分别为0.120、0.460和0.400,多态信息量分别为0.1064、0.3444、0.3108。(5)利用这3个位点对16个家系进行间接基因诊断,有7个家系可作出诊断,家系的诊断率为43.75%(7/16),其中有5个家系可以用rs3861554位点提供诊断信息,2个家系可以用rs1509787位点提供诊断信息,1个家系可以用rs1470586位点提供诊断信息。(6)联合运用这5种多态位点可对9个家系进行诊断,家系的诊断率为56.25%(9/16)。结论:(1)内含子22倒位和内含子1倒位检测对所选家系中重型HA进行直接基因诊断的诊断率有限。(2)FⅧ基因内的3个SNP位点rs1509787、rs3861554、rs1470586在所选人群中具有较高的杂合率,可用于HA家系的基因诊断。(3)联合应用这3个SNP位点及常用的Bcl I和Stl4(DXS52)两个多态位点进行家系连锁分析可提高HA家系的诊断率。