目的:一、研究辐射对胚胎干细胞的影响及其分子机制;二、开发一种简便高效、安全无毒且经济环保的细胞运输方法,以便研究人员在全球范围内实现常温条件下的细胞运输。方法:一、为研究辐射对胚胎干细胞的影响,我们首先进行辐射剂量的梯度实验,比较照射0.5 Gy、1 Gy、2 Gy、4 Gy、6 Gy、8 Gy X-射线对小鼠胚胎干细胞的影响。利用qPCR和Western Blots检测主要干性及三胚层标志基因表达的变化,我们发现,8 Gy的X-射线辐照显著上调了三胚层分化基因的表达且下调了主要干性因子蛋白的表达。因此,我们选用该辐射剂量进行后续实验。我们实验结果表明:辐射会上调三胚层主要分化基因的表达,降低主要干性因子蛋白的表达,促进胚胎干细胞向三胚层的分化。为了研究辐射促进胚胎干细胞向三胚层分化的分子机制,我们利用RNA-seq比较辐射组和对照组胚胎干细胞中基因的表达差异,我们发现辐射导致Yap及其靶基因表达的上调,我们利用qPCR进行了验证。通过分析ChIP-seq数据,找到YAP在基因组上主要的结合位点,结合ChIP-qPCR实验,我们发现辐射照射后,YAP在其靶基因上的结合增加。我们的研究显示,辐射促进Yap及其靶基因的表达。为了探讨辐射是否通过上调Yap的表达促进胚胎干细胞向三胚层分化,我们在胚胎干细胞中过表达Yap,结果显示,过表达Yap下调主要干性基因的表达,促进三胚层主要分化基因的表达,这表明辐射可能通过调控Yap基因的表达,调控胚胎干细胞分化的分子机制。二、我们开发了将细胞重悬于100%的胎牛血清（Fetal bovine serum,FBS）中在常温条件下进行运输的方法。我们将小鼠胚胎干细胞（mESCs）、Hela、MEF、A549、293T、MS1、J774A.1和Huh7八种实验室常用细胞系进行该新方法和传统干冰运输方法的比较。具体如下:我们将待运输的细胞消化为单细胞悬液,离心收集沉淀,重悬于装有800μlFBS的Eppendorf管中,分别在4℃、20℃及30℃条件下储存细胞3和5 d。对照采用传统方法,重悬于含10%DMSO的培养基中在干冰中保存相同天数。通过MTT实验检测运输后细胞的活性,并绘制复苏后的细胞的生长曲线,从而比较不同运输方法的效果。结果:一、辐射上调三胚层marker基因的表达,下调主要干性因子的蛋白水平,促进胚胎干细胞向三胚层的分化;二、辐射上调Yap基因的表达,增加YAP在其靶基因上的富集,增加YAP靶基因的表达;三、过表达Yap下调主要干性基因的表达,上调三胚层marker基因的表达,促进胚胎干细胞的分化;四、辐射可能通过上调Yap基因的表达,从而促进胚胎干细胞向三胚层的分化;五、与传统方法相比,采用新方法运输的细胞在细胞形态、增殖能力、细胞活性、胚胎干细胞的干性及其分化能力等细胞特性方面未见明显差异,所以我们开发了一种在常温条件下进行细胞运输的方法。结论:一、辐射通过上调Yap及其靶基因的表达,促进胚胎干细胞向三胚层分化;二、我们开发了一种在常温条件下进行细胞运输的方法,该方法无需干冰的消耗,简单安全、高效且经济环保。