【摘 要】
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病原微生物是对公众健康构成威胁的主要生物因素。弧菌是食源性疾病的主要致病因素之一,由弧菌引起的疾病分布广泛,发病率高。弧菌病的防治主要以抗生素和化学药物为主,喹诺酮类抗生素环丙沙星是治疗弧菌感染的首选药物之一,目前已广泛应用于临床和兽医学。随着抗生素的广泛应用,越来越多的病原体产生了耐药性,随之而来的是新病原体的出现及现有病原体不断进化,使得病原菌的耐药问题愈发严重。本文旨在通过对深圳地区弧菌的流
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病原微生物是对公众健康构成威胁的主要生物因素。弧菌是食源性疾病的主要致病因素之一,由弧菌引起的疾病分布广泛,发病率高。弧菌病的防治主要以抗生素和化学药物为主,喹诺酮类抗生素环丙沙星是治疗弧菌感染的首选药物之一,目前已广泛应用于临床和兽医学。随着抗生素的广泛应用,越来越多的病原体产生了耐药性,随之而来的是新病原体的出现及现有病原体不断进化,使得病原菌的耐药问题愈发严重。本文旨在通过对深圳地区弧菌的流行状况及耐药基因的分布与传播机制的研究,对抗生素的合理使用和临床预防、治疗食源性弧菌病提供一定的理论依据。主要研究结果如下:（1）为了探究弧菌的流行状况及耐药情况,我们共采集了801个样品,包括猪肉、牛肉、鸡肉和对虾,本次采样结果的阳性样品率为32.71%（262/801）,其中从对虾样品中分离到的弧菌最多,占64.3%（379/589）,其次是猪肉25.3%（149/589）,由此可见弧菌的污染主要以对虾等一些海产品为主。而且主要以副溶血性弧菌（65.5%）及溶藻弧菌（29.7%）较为普遍。14种抗生素的药敏试验表明大多数的分离菌株对β-内酰胺类抗生素氨苄西林（AMP）耐药,高达90%,其次是磺胺类抗生素复方磺胺甲恶唑（SXT）,约占30%,其余抗生素的耐药率均不足20%,另外没有菌株对美罗培南（MRP）和阿米卡星（AMK）耐药。（2）为了探究喹诺酮耐药基因qnrVC的分布情况,我们挑取了74株耐环丙沙星的弧菌（MIC≥4μg/m L）进行PCR检测,阳性率为53%（39/74）,包括qnrVC1、qnrVC4、qnrVC5、qnrVC6、qnrVC7五种已知亚型以及qnrVC8和qnrVC9两个位于染色体上的新基因亚型。qnrVC8与qnrVC6的相似率达98%（A166→E,N185→Y）,qnrVC9与qnrVC7的相似率高达99%（A100→V）。通过对新基因克隆得到的转化重组子的MIC测定,表明二者能够降低病原菌对环丙沙星的敏感性。通过对随机挑取的20株qnrVC阳性菌株和20株qnrVC阴性菌株进行喹诺酮抗性决定区编码基因gyr A、gyr B、par C和par E突变检测,gyr A（Ser83→Ile）和par C（Ser85→Leu）均发生了氨基酸的替代,gyr B及par E则均未检测到突变。虽然PMQR基因相对于染色体介导的耐药来说是低水平的,但其能促使靶位突变频率增加,从而产生更高水平的耐药株。（3）为了分析比较74株耐环丙沙星的菌株间的同源性,采用PFGE对其分子分型,结果表明他们之间存在不同的酶切图谱,表现出显著的遗传多样性。因此,不同耐药菌株之间的克隆传播和非克隆传播机制同样都在qnrVC基因的传播中扮演着重要的角色。（4）通过将耐环丙沙星的弧菌与E.coli J53共同培养,发现有三株弧菌携带qnrVC5基因的质粒能够转移至E.coli J53中,并使其对环丙沙星的耐药性提高16倍。同时Southern印记杂交技术结果表明首次在大小约130kbp的质粒上检测到qnrVC7基因。
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