原发性肝癌(下称肝癌)是世界上最常见的十种恶性肿瘤之一，全球每年约有45-100万人死于肝癌，43.7％的肝癌发生在中国，我国肝癌死亡率在恶性肿瘤死亡率中占第二位。肝癌多合并肝硬化，一旦发现多为中晚期，失去了手术机会，对放化疗耐受性低，疗效差。目前多采用肝动脉插管化疗栓塞(TACE)、超声引导无水乙醇瘤内注射(PEI)、多电极射频、超声聚焦刀等局部治疗，以及中医药治疗。姚树坤教授根据中医传统理论和近十年的临床研究，以清热解毒、破瘀散结、健脾益气为治法，针对大多数肝癌患者的中医证型，研制成肝癥口服液，经临床和基础实验证实对肝癌前病变及癌变有明显的阻断作用。从癌基因、抑癌基因、抑制血管形成、细胞凋亡、细胞周期和免疫机制等多角度综合研究肝癥口服液的作用机理，表明肝癥口服液多环节、多靶点分子网络的作用机理，丰富与完善了中药抗癌研究的理论体系。 肝细胞癌变的主要特征是肝细胞异常增殖，癌基因的激活和抑癌基因的失活是肝细胞癌变的原因，而癌基因和抑癌基因的变异引起了细胞内信号传导途径异常激活则是肝细胞癌变的主要机制之一。MAPK级联反应是一种MAP激酶途径。ERK通路激活后，进入细胞核，引起c-fos、c-jun等一系列基因过度表达，导致细胞增殖。 本研究以二乙基亚硝胺(DEN)诱发实验性肝癌大鼠为模型，从信号传导的角度，观察肝癥口服液阻断大鼠肝癌前病变和癌变的作用及对转化生长因子α(Transforming growth factor α，TGF α)诱导SMMC-7721细胞Raf-MEK-ERK信号传导的影响。 1、肝癥口服液对大鼠肝癌形成过程中ERK蛋白的影响 将雄性SD大鼠随机分成4组，A组为正常对照组；B组为病理对照组；C组为肝癥口服液组；D组为苦参素组。除正常对照组外，其余大鼠给予DEN 35mg／kg，灌胃，2次／周，共16周， 中文摘要预防组同时给予药物预防＊ 6周后所有实验组停用 DEN，各药物预防组继续用药至 20周末实验结束，于第 12周、第 2 0周末分批处死大鼠，分别进行：（1）第 12周、第 20周末肝组织切片常规HE染色，观察形态变化；（2）第 12周，肝组织切片做 Y－谷氨酚转肽酶（＊＊T）组化染色，对＊＊T阳性灶进行定量分析：G）第 12周、第 20周末免疫组化方法观察 ERK在肝组织中的表达。结果发现： 门）实验第12周末，B组大鼠肝细胞排列紊乱，肝小叶”结构消失，假小叶形成，可见大量异常肝细胞构成的不典型增生结节。各药物预防组肝细胞异型性增生灶明显少于B组，异型性较轻。C组部分大鼠肝小叶结构存在，增生结节不明显。第20周末，B组大鼠肝脏可见典型的弥漫性癌结节、畸形核分裂。C、D组以肝硬化为主，仅个别可见癌结节，病理改变较B组减轻。各组大鼠镜下观察肝癌发生率：B组88．9％，C组23刀8％，D组33．33％，C、D组肝癌发生率显著低于B组沪＜0刀1 或P”0．05卜C、D组比较无统计学差异。 （2）B组肝组织GGT酶组化染色单位切面病灶数、单位面积内病灶面积、病灶平均面积三项指标显著高于各药物预防组（＜0＊5或＊、0＊1）。 门）ERK免疫组化染色：12周末时 B组假小叶中的肝细胞胞浆和胞核明显着色，且以异型增生灶为重，坏死灶中肝细胞胞浆着色，毛细胆管明显着色，纤维间隔不着色。C 组肝细胞胞浆和胞核着色明显减轻，毛细胆管轻微着色，D 组肝细胞异型增生灶及毛细胆管均着色，但较B组轻。20周时B 组肝细胞明显着色，且以癌巢周围为重，毛细胆管及小胆管也明显着色，C 组肝细胞着色较轻，D组肝细胞异型增生灶及癌巢周围、毛细胆管均着色，但较B组轻。 上述结果表明：肝瘸日服液能阻断二乙基亚硝胺所致大鼠肝癌前病变和癌变的发生，效果优于苦参素。肝瘤日服液能降低MAPKS通路中ERK通路的活性，抑制细胞过度增殖。 2、TGF a对肝舀绍胞 We7721 R．f卧ERK的膀响 2 中文摘要 癌基因ras对癌细胞的增殖和凋亡具有重要的调控作用，rs传导 通路与肝癌细胞的作用有待研究。Ras－RlMEKERK细胞信号传递通 路是MAPKs众多通路中的一个。ERK通路激活后，进入细胞核，引 起 c－fos、Cdun等一系列基因过度表达，导致细胞增殖。TGF a与肝 癌细胞的增殖密切相关。本研究旨在探讨 TGF Q对肝癌细胞 SMMC－ 772 Raf、MEK、ERK表达的影响。 门）MTT法检测 TGF a对肝癌细胞 S删CJ72细胞的增殖作 用。in g／L TGF a作用 24小时对肝癌细胞 SMMC刁72增殖作用较 弱，增殖率仅为3％，与正常血清相比差别不明显，P＞0刀5：作用48－刁时后效果增强，增殖率达 16％，P＜0＊5。5 u g／L TGF a作用 24 小时对肝癌细胞有明显的增殖作用，增殖率达 180，P＜0．05；作用 48 ／J’时效果更加明显，增殖率达24％，P刃刀