腐败希瓦氏菌是南美白对虾（Penaeus Vannamei）冷藏水产品的主要优势腐败菌,目前对腐败希瓦氏菌检测主要依靠平板法和普通PCR。平板培养法操作繁琐,耗时长,普通PCR不能区分死菌和活菌。将EMA与传统PCR或q PCR结合可以选择性的扩增活菌DNA,从而快速、准确的区分死菌和活菌,有效降低传统PCR或q PCR检测产生的假阳性。本研究建立了一种快速检测腐败希瓦氏菌活菌的叠氮溴化乙锭与实时q PCR相结合（EMA-q PCR）方法,旨在为腐败希瓦氏菌活菌的快速检测奠定基础。本次试验研究内容和结果如下:1.冷藏南美白对虾中细菌的分离与鉴定自成都市不同区县及成都周边县市多家水产市场及超市采集到冷藏南美白对虾样品共400尾,从肌肉和肝胰腺分离细菌,共获得184株纯化菌株,并进行16S r DNA测序。结果显示,共包括11种细菌,其中,腐败希瓦氏菌和副溶血性弧菌比例最高,各分离到48株。2.腐败希瓦氏菌EMA-q PCR检测方法的建立根据腐败希瓦氏菌gyr B基因设计特异性引物。用不同浓度的EMA和不同作用时间优化检测方法。研究该方法对活菌的最低检出限、能有效抑制死菌DNA扩增的最高菌液浓度及在不同比例死活菌中的检测效果。用11种不同细菌验证该方法的特异性。结果表明:最佳作用条件为终浓度为20μg/m L的EMA作用20 min。建立的EMA-q PCR法最低检测活菌的浓度为5×101CFU/m L,灵敏度较高。抑制死菌最高浓度为5×105CFU/m L。对于不同比例的死活混合菌,EMA能够抑制死菌DNA扩增,但对活菌DNA扩增无影响。特异性试验结果表明该方法能有效区分腐败希瓦氏菌和其它细菌,特异性良好。提示EMA-q PCR检测技术能够快速、准确的区分腐败希瓦氏菌死菌和活菌。3.EMA-q PCR检测方法在冷藏南美白对虾中的应用自成都市不同区县及成都周边县市多家水产市场及超市采集到冷藏南美白对虾样品共202尾,分别用平板法联合16S r DNA鉴定、普通q PCR和EMA-q PCR进行腐败希瓦氏菌的检测及鉴定。结果显示:EMA-q PCR、平板培养和普通q PCR分别在32、24和38尾对虾中均检测到腐败希瓦氏菌。表明EMA-q PCR既能克服传统平板分离培养法对活菌的漏检及检测周期长的不足,也能避免普通q PCR不能区分活菌的不足,可以在生产中进行推广,有利于冷藏对虾腐败希瓦氏菌活菌的快速准确检测。