【摘 要】
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背景随着医疗科技的发展,新兴的干细胞技术为解决临床上难治性疾病带来了希望,其对疾病的改善效果已在多种动物疾病模型和临床研究中获得证实。而间充质干细胞（MSCs）在肿瘤治疗中的应用及潜在效果也已初步获得证实,为肿瘤患者的治疗提供了创新的思路。经血源子宫内膜干细胞（MenSCs）凭借其方便且无创伤的采集分离方式,以及良好的增殖活性等方面的优势,在干细胞治疗领域获得了国内外的广泛关注。目的1.通过具有正
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背景随着医疗科技的发展,新兴的干细胞技术为解决临床上难治性疾病带来了希望,其对疾病的改善效果已在多种动物疾病模型和临床研究中获得证实。而间充质干细胞（MSCs）在肿瘤治疗中的应用及潜在效果也已初步获得证实,为肿瘤患者的治疗提供了创新的思路。经血源子宫内膜干细胞（MenSCs）凭借其方便且无创伤的采集分离方式,以及良好的增殖活性等方面的优势,在干细胞治疗领域获得了国内外的广泛关注。目的1.通过具有正常免疫系统的小鼠肿瘤模型,验证MenSCs移植对乳腺癌生长及转移的抑制作用;2.通过现代生物学技术从细胞因子分泌、淋巴细胞活化等方面综合分析MenSCs抑制乳腺癌生长和转移的潜在机制。方法1.取EMT-6细胞（乳腺癌细胞）进行正常培养,于第零天（day0）注射入具有正常免疫系统的BABL/c小鼠及裸鼠腋下,day5时可检测到小鼠腋下有明显颗粒状肿物,视为荷瘤小鼠模型建立成功;2.将上述乳腺癌荷瘤小鼠模型随机分成3组,MenSCs处理组:于day 5、day 12及day 19时,模型小鼠尾静脉注射体积为0.1m L的MenSCs悬液（1×10~7个/m L）;CTX处理组:于day5至day11,小鼠连续7天腹腔注射0.1m L PBS溶解的CTX溶液（25mg/kg）;PBS组:于day 5、day 12及day 19时,模型小鼠尾静脉注射体积为0.1m L的PBS溶液。实验周期为30天,于day5天起,每隔2天对小鼠腋下的肿瘤体积进行测量记录;实验结束后,处死小鼠,分离血清和相关组织进行后续分析;3.流式细胞术检测小鼠血液中相关淋巴细胞比值及绝对值;常规生化方法检测小鼠肝肾功能变化;蛋白芯片检测小鼠血清中细胞因子表达水平;HE染色检测小鼠脾脏、肾脏、肝脏及肺脏形态学变化,评估乳腺癌细胞潜在的转移的情况;免疫荧光检测小鼠脾脏中不同类型淋巴细胞的数量;4.收集乳腺癌患者血液,密度梯度离心分离提取人外周血单个核细胞（PBMCs）,过夜培养后与MenSCs接触式共培养72h,CCK8法检测悬浮PBMCs细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,WB检测相关蛋白变化。结果1.MenSCs能够显著抑制乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤的生长,以及转移至肺脏和肝脏,并且干细胞输入对小鼠主要脏器功能无明显副作用,但MenSCs移植不能明显抑制乳腺癌荷瘤裸鼠模型腋下肿瘤的生长;2.蛋白质芯片结果显示经MenSCs移植后,小鼠血清中IL-6和IFN-γ的表达水平在小鼠体内均显著上调,而促血管再生因子VEGF被显著下调;3.流式细胞术检测结果显示MenSCs移植可显著维持小鼠体内的T淋巴细胞总数;而免疫荧光结果显示MenSCs移植后可显著激活小鼠脾脏中各类型淋巴细胞;4.体外实验结果表明MenSCs能够显著维持肿瘤患者PBMCs的活性。结论1.MenSCs移植能够显著抑制正常小鼠体内乳腺癌细胞的生长及转移;2.MenSCs极有可能是通过活化并维持机体淋巴细胞活性,提高机体免疫力,释放大量抑瘤因子,从而达到显著抑制乳腺癌的生长和转移效果。
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