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目的:探讨保罗样激酶1(PLK1)和p53蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及其临床意义。构建PLK1—shRNA重组质粒,并转染食管鳞癌Eca—109细胞株,探讨重组质粒对Eca—109细胞株PLK1mRNA及蛋白的抑制作用,进一步对p53mRNA及蛋白表达的影响。
方法:采用免疫组织化学法分别检测87例食管鳞状细胞癌、53例癌旁组织及42例正常食管黏膜组织中PLK1及p53蛋白的表达,并分析两者的表达水平与临床病理因素的关系。构建靶向人PLK1基因的RNA干扰表达质粒(PLK1—shRNA),将该干扰质粒转染到人食管鳞癌细胞Eca—109中,用Real—time PCR分析检测PLK1基因和p53基因mRNA表达水平的变化,采用Western blot技术分析检测PLK1基因和p53基因蛋白表达水平的变化。
结果:(1)PLK1蛋白在食管鳞状细胞癌、癌旁组织及正常黏膜组织中的阳性表达率分别为57.5%、50.9%和26.2%;p53蛋白的阳性表达率分别为48.3%、52.8%和23.8%。食管鳞癌组织PLK1、p53阳性表达率与正常黏膜组织比较差异均有统计学意义(x2分别为11.119和7.047,P<0.05),癌旁组织PLK1、p53阳性表达率与正常黏膜组织比较差异均有统计学意义(x2分别为5.982和8.223,P<0.05),两者在食管鳞癌组织与癌旁组织比较差异均无统计学意义(x2分别为0.567和0.273,P>0.05)。(2)食管鳞癌组织中PLK1和p53的蛋白表达与淋巴结转移及TNM分期密切有关(P<0.05),而PLK1的蛋白表达还与肿瘤浸润深度有关(P<0.01)。(3)PLK1和p53在食管鳞状细胞癌组织中的表达呈负相关(r=—0.286,P<0.01)。(4)酶切鉴定和DNA测序分析显示,PLK1靶向RNA干扰重组质粒构建成功。(5)转染后48h和72h,转染效率分别是65%和55%。(6)Real—time PCR结果显示,转染RNA干扰表达质粒(PLK1—shRNA)后,PLK1—shRNA组Eca—109细胞48h、72h较转染液对照组的PLK1基因mRNA表达分别降低了72.8%和58.5%(P<0.05);PLK1—shRNA组Eca—109细胞48h、72h较转染液对照组的p53基因mRNA表达分别升高了61.3%和72.9%(P<0.05)。(7)Western blot结果显示,转染RNA干扰表达质粒(PLK1—shRNA)后,PLK1—shRNA组Eca—109细胞48h、72h较转染液对照组的PLK1基因蛋白表达分别降低了67.6%和56.1%(P<0.05);PLK1—shRNA组Eca—109细胞48h、72h较转染液对照组的p53基因蛋白表达分别升高了46.6%和54.1%(P<0.05)。
结论:PLK1和p53蛋白表达与食管鳞状细胞癌发生发展密切相关,联合检测PLK1和p53蛋白对食管鳞癌的预后判断具有重要意义。干扰重组质粒PLK1—shRNA能有效抑制人食管鳞癌Eca—109细胞株PLK1mRNA和蛋白的表达,从而有效地升高p53mRNA和蛋白的表达,说明PLK1基因抑制p53基因在Eca—109细胞中的表达,为进一步研究以PLK1为靶点的抗肿瘤治疗奠定了基础。