玫瑰遗传多样性的SRAP分析与品种指纹图谱构建

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玫瑰(Rosa rugosa)是蔷薇属重要的观赏灌木,具有重要的观赏价值和经济价值,也是蔷薇属植物育种的重要亲本。本研究以4份野生玫瑰种质、46个玫瑰品种、2个月季品种、2个蔷薇品种和2个黄刺玫品种为材料,以SRAP分子标记为研究方法,对玫瑰的遗传多样性及其与近缘种植物的亲缘关系进行了研究,在此基础上构建了玫瑰品种的指纹图谱,为杂交育种的亲本选择、品种鉴定、新品种保护、品种分类等奠定了基础。主要研究结果如下:1.在正交试验设计的基础上得到了玫瑰最适的SRAP-PCR反应体系,即在25μL反应体系中,含有10×PCR buffer 2.5μL,Mg2+ 2.0 mmol/L,dNTPs 0.20 mmol/L,Taq酶1.5U,引物0.25μmol/L,模板1.0 ng/μL,其中,各因素对PCR反应的影响从大到小依次为:Taq酶,dNTPs,引物,Mg2+,模板;扩增程序为94℃预变性5 min; 94℃变性1 min,35℃退火1 min,72℃延伸1 min,进行5个循环;94℃变性1 min,50℃退火1 min,72℃延伸1 min进行30个循环;72℃延伸10 min, 4℃保存。2.从100对引物中筛选出了能稳定扩增的15对引物,利用这15对引物对试验材料进行了扩增,共扩增出264个位点,其中227个为多态性位点,多态性比率为85.98%,平均每对引物扩增出17.6个位点和15.13个多态性位点;有效等位位点数在1.3854~1.6687之间,均值为1.5548;Nei’s遗传多样性指数(H)在0.2068~0.3763之间,均值为0.3187;Shannon信息指数(I)在0.2296~0.5520之间,均值为0.4705。3.供试材料之间的遗传相似系数为0.5113~0.9852之间,平均值为0.7545,说明材料间的亲缘关系较近;玫瑰与黄刺玫的遗传相似系数在0.5205~0.6755之间,平均值为0.5981;玫瑰与月季的遗传相似系数在0.5405~0.7528之间,平均值为0.6412;玫瑰与蔷薇的遗传相似系数在0.5965~0.7528之间,平均值为0.6831,说明玫瑰与蔷薇和月季的亲缘关系较与黄刺玫近,玫瑰与蔷薇的亲缘关系最近。4. 50份玫瑰种质的平均Nei’s遗传多样性指数为0.2665,平均Shannon信息指数为0.4033;4份野生玫瑰的平均Nei’s遗传多样性指数为0.1225,平均Shannon信息指数为0.1787,46个玫瑰品种的平均Nei’s遗传多样性指数为0.2684,平均Shannon信息指数为0.4059,可见玫瑰品种的两项指标都显著高于野生种质,说明玫瑰品种之间存在着更大的变异,有着更丰富的遗传多样性。5.采用UPGMA法对供试材料进行聚类,56份材料可以明显分为玫瑰、蔷薇和月季、黄刺玫三类;50份玫瑰材料可以分为中国玫瑰系、月季系、蔷薇系,中国玫瑰系又分为七组,与按照株型、花型的分类结果相一致。玫瑰的品种分类应首先考虑其亲本来源,再根据株型、花型等特征进行分类。6.筛选出了3对核心引物用于构建玫瑰品种指纹图谱,3对引物两两组合均能将所有的品种区分开。采用Gel2.0软件构建了46个玫瑰品种标准指纹图谱,经验证,在相似率为95%时,图谱的鉴别准确率为100%。
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