目的:肠道屏障是机体的重要防线,屏障的完整性与多种疾病的发生、进展成正相关。安石榴苷（PUN）是一种酚类化合物,提取自石榴皮,具有多种药理活性,比如有抗氧化、消炎等。本研究旨在研究PUN对肠道菌群的影响,以及其通过对TLR4/NOD2信号通路干预,保护肠道屏障的作用,为与肠道屏障相关疾病的预防与治疗提供实验依据。方法:将45只BALB/c小鼠用致病性大肠杆菌O101灌胃建立细菌性肠炎模型后,随机分为模型组（Model）、PUN给药组和头孢克肟（CEF）给药组,另取15只正常BALB/c小鼠作为对照组（Control）,给药组连续灌胃给药7天。给药过程中观察各组小鼠的体征并计算每天的DAI与体重变化率。给药结束后取肠组织,分离出肠道内容物,16S r DNA高通量测序法检测小鼠肠道菌群多样性和丰度,分析其结构与功能的变化;HE染色法观察肠组织的病理改变;免疫组化法检测肠黏膜中Occludin和ZO-1的表达;MPO活性检测小肠粘膜屏障里中性粒细胞的浸润程度;ELISA法检测血清LPS、IL-6、TNF-α水平;q PCR检测肠壁炎症相关因子NOD2、TLR4、NF-κB p65、TNF-α、IL-6 m RNA的表达;Western Blot法检测肠壁中NOD2、TLR4、NF-κB p65、TNF-α、IL-6蛋白的表达水平。利用数据库筛选出安石榴苷与细菌性肠炎相交集的靶点,导入STRING数据库检索蛋白互作关系,对关键靶点进行筛选;利用DAVID数据库进行富集分析,采用特定的软件进行分子对接,预测有效成分与关键靶点结合的程度。将脂多糖（LPS）、胞壁酰二肽（MPD）与Caco2细胞分组共孵育,ELISA法检测细胞上清液中IL-6的浓度;构建NOD2基因沉默的慢病毒载体,转染Caco2细胞后利用PCR和WB进行验证基因的表达降低,随后将细胞与配体再次共孵育检测细胞上清液中IL-6的浓度。结果:1.与模型组比,安石榴苷组小鼠DAI评分显著降低,HE染色法显示,模型组小肠黏膜充血严重、而用药组小肠组织水肿显著减轻。2.免疫组化法显示,用药组小肠组织黏膜中Occludin和ZO-1的表达要比模型组要高。3.PUN可以抑制小肠粘膜屏障中的MPO活性,血清中的LPS、IL-6、TNF-α水平。4.PUN可以抑制肠壁炎症相关因子NOD2、TLR4、NF-κB p65、TNF-α、IL-6 m RNA的表达与蛋白的表达水平。5.16S r DNA高通量测序提示,PUN可以改善肠炎小鼠肠道菌群多样性,结构组成与功能变化。6.网络药理学筛选出安石榴苷与疾病的交集靶点130个;富集分析发现交叉基因在癌症的调控和TNF信号通路中密切相关。同时,分子对接模型显示出,安石榴苷活性成分与核心靶点TNF、IL-6等均有一定的结合活性。7.体外实验中,1μg/ml LPS与0.3μg/ml MDP孵育24h是对于Caco2细胞的最佳安全剂量与时间。细胞上清液中IL-6的浓度,在NOD2基因沉默后比沉默前显著降低。结论:1.PUN能明显减轻肠炎小鼠的临床表现和病理损害,治疗效果与抗生素相接近。2.PUN治疗改善肠炎小鼠肠壁通透性的影响。3.PUN治疗改善肠炎小鼠肠壁的肠上皮损伤。4.PUN能够抑制NOD2/TLR4信号的激活以缓解炎症损伤。5.PUN能够改善肠道菌群结构。6.细胞实验表明,NOD2/TLR4之间具有协同关系。