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受体及其调节肽通常在肿瘤细胞中异常表达,这就使得它们成为潜在的治疗靶点。人血激肽Hemokinin-1是速激肽受体(Neurokinin-1 receptor,NK1R)的肽类配体。目前已经有文章报道恶性黑色素细胞及其组织中有NK1R的表达,但是其在恶性黑色素瘤细胞内是否参与调控细胞的迁移过程尚不清楚。本论文中,主要对hHK-1(Human Hemokinin-1)和NK1R是否参与介导A375细胞的迁移及其信号转导机制进行了深入的研究。GEO(基因表达综合数据库)数据显示NK1R的表达量与黑色素瘤细胞的侵袭性能相关。迁移实验表明,hHK-1处理细胞后能够剂量依赖的引起A375和B16F10细胞的迁移,且NK1R的拮抗剂L732138能够拮抗其迁移作用,说明hHK-1引起的细胞迁移是通过NK1R而发挥作用的,且迁移能力与细胞内NK1R的表达量成正相关。进一步的研究发现,hHK-1可以增加A375细胞外基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的活性,上调胞内MMP-2和膜型基质金属蛋白酶-1(MT1-MMP)蛋白的表达,进而促进细胞迁移。接着深入研究了其信号转导机制,我们发现hHK-1能够引起A375细胞内信号分子丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)的磷酸化,而ERK、JNK和p-38的抑制剂能够拮抗hHK-1引起的MMP-2和MMP-14蛋白表达水平的上调和细胞迁移,说明hHK-1引起的A375细胞迁移是通过刺激MAPKs的磷酸化来完成的。在进一步的研究中发现蛋白激酶A(PKA)的抑制剂H89、蛋白激酶C(PKC)的抑制剂Bisindolymaleimide I作用于细胞后能够抑制hHK-1引起的下游MAPKs的磷酸化,说明hHK-1与NK1R结合后通过Gq-PKC和Gs-PKA通路发挥促迁移功能,进而通过引起激酶磷酸化来发挥信号传递作用。研究转录因子时我们发现hHK-1能够激活Sp1,最终引起MMP-14蛋白表达水平的上调,细胞发生迁移。综上所述,在恶性黑色素瘤A375细胞中,hHK-1激活NK1R后促进了细胞的迁移,该迁移作用是由于hHK-1在体内引起MMP-2的活性增加和MMP-2和MT-MMP蛋白的表达水平上调来实现的。这些数据表明hHK-1和NK1R是重要的调控黑色素瘤细胞迁移的生物分子,它有可能成为治疗黑色素瘤的新型靶点。