香水莲多糖的分离鉴定及体外抗炎机制研究

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香水莲(Nymphaea hybrid)香味淡雅、花色丰富,有“红、黄、紫、蓝、赤、茶、绿、金、白”等九大颜色的品种,故又名“九品香水莲”。近年来,在海南,浙江和广东等南方地区种植,并形成一定规模。香水莲鲜花不仅可以观赏、炖煮食物、制作甜品等,还能制成干花用于泡茶。研究发现,香水莲的镇静安神、抗衰老和降血脂作用与香水莲中所含的黄酮和多酚类物质有关,而香水莲多糖的生物活性仅报道了保湿和抗氧化作用,对于香水莲多糖的抗炎作用及机制未曾研究。因此,本文以黄色香水莲干花瓣为原料提取多糖,响应面分析优化提取工艺。对香水莲粗多糖进行分离纯化,并对得到的均一组分进行结构表征。采用脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导RAW264.7细胞建立炎症模型,探究香水莲多糖的抗炎作用及机制。研究结果如下:热水浸提法提取香水莲多糖,以香水莲多糖提取率为指标,优化提取工艺。优化后确定香水莲多糖的最佳提取条件为:提取温度为65℃、提取时间为1.6 h、液料比为54:1 m L/g,三次平行实验测得实际提取率15.61%。采用层析柱法对香水莲花粗多糖进行分离,得到均一组分。苯酚硫酸法测糖含量,香水莲多糖的总糖含量为87.8%,是一种分子量为5945 Da的中性多糖。香水莲多糖主要由葡萄糖和半乳糖组成,其摩尔比为0.905:0.095。红外光谱分析表明香水莲多糖是一种吡喃型多糖。结合甲基化结果以及一维和二维核磁信息分析,推断出主要糖苷键链接方式为:→4)-α-D-Glcp-(1→4,6-α-D-Glcp-(1→α-D-Glcp-1→,并初步建立起重复单元。刚果红实验显示,香水莲多糖不具有三螺旋结构。扫描电镜分析香水莲多糖的表观形貌,结果表明,香水莲多糖为致密、光滑、椭圆形颗粒状的结构。通过1μg/m L LPS诱导RAW264.7细胞建立炎症模型,探究香水莲多糖对炎症细胞的抗炎作用及机制。研究发现,香水莲多糖显著抑制了LPS诱导的RAW264.7细胞的吞噬能力、NO释放和ROS产生,显著降低炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的分泌。NF-κB(Nuclear factor kappa-B,NF-κB)炎症通路的免疫荧光分析表明,香水莲多糖通过增加IκB蛋白表达,抑制NF-κB的磷酸化和NF-κB通路的激活,从而下调炎症因子TNF-α的表达。以上数据表明,香水莲多糖对LPS刺激的RAW264.7细胞具有很好的抗炎作用。
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