【摘 要】
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目的:研究人髓核细胞（NPCs）来源外泌体在诱导人尿源干细胞（USCs）向髓核细胞分化中的作用,并对其生物学效应进行了探讨。方法:收集健康志愿者晨尿,离心法提取人尿源干细胞并培养。利用倒置显微镜观察细胞形态,利用流式细胞技术和三系诱导分化技术,对尿源干细胞的表面标记和分化性能进行了评估。通过腰椎椎间孔镜手术取得突出的髓核组织,消化后提取NPCs;采用超速离心从上清液中提取NPCs外泌体,并对其进行
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目的:研究人髓核细胞（NPCs）来源外泌体在诱导人尿源干细胞（USCs）向髓核细胞分化中的作用,并对其生物学效应进行了探讨。方法:收集健康志愿者晨尿,离心法提取人尿源干细胞并培养。利用倒置显微镜观察细胞形态,利用流式细胞技术和三系诱导分化技术,对尿源干细胞的表面标记和分化性能进行了评估。通过腰椎椎间孔镜手术取得突出的髓核组织,消化后提取NPCs;采用超速离心从上清液中提取NPCs外泌体,并对其进行透射电镜观察、粒径分析检测及蛋白免疫印迹技术检测表面标志物。将PKH26染料标记NPCs外泌体与GFP慢病毒转染的P3代USCs共孵育12h,镜下观察USCs对NPCs外泌体的摄取情况。实验分三组:外泌体组,将USCs与NPCs外泌体共培养;共培养组,将USCs与NPCs Transwell小室培养;对照组,USCs单独培养。应用荧光定量PCR（q RT-PCR）技术检测三组USCs中髓核标志基因m RNA相对表达量,对诱导效果进行定量比较。同时应用CCK-8法检测三种处理措施对USCs增殖情况的影响。结果:实验提取的尿源干细胞成骨、成脂、成软骨诱导后均分化成功,并且流式细胞分析示标志物:CD29（99.57%）、CD44（97.46%）、CD73（97.71%）高表达,CD31（0.59%）、CD45（0.19%）低表达。实验提取的髓核细胞外泌体,透射电镜显示为50～100nm的扁圆形双膜结构,蛋白免疫印迹技术显示CD63、CD81、Tsg101蛋白表达呈阳性,不表达阴性蛋白Calnexin。荧光显微镜观察显示经PKH26红色染料标记NPCs外泌体出现在USCs经GFP绿色荧光转染的细胞质中,可证实USCs在体外可以摄取NPCs外泌体。CCK-8细胞增殖实验显示外泌体组USCs细胞增殖明显高于共培养组及对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）。q RT-PCR检测发现外泌体组髓核标志基因（包括COL2A1、ACAN、HIF-1α、SOX-9）的m RNA表达量明显高于对照组及共培养组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:研究证明人髓核细胞外泌体可促使人尿源干细胞向类髓核细胞定向分化。外泌体诱导具有明显诱导作用及细胞增殖作用。
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