【摘 要】
:
目的:研究人髓核细胞(NPCs)来源外泌体在诱导人尿源干细胞(USCs)向髓核细胞分化中的作用,并对其生物学效应进行了探讨。方法:收集健康志愿者晨尿,离心法提取人尿源干细胞并培养。利用倒置显微镜观察细胞形态,利用流式细胞技术和三系诱导分化技术,对尿源干细胞的表面标记和分化性能进行了评估。通过腰椎椎间孔镜手术取得突出的髓核组织,消化后提取NPCs;采用超速离心从上清液中提取NPCs外泌体,并对其进行
论文部分内容阅读
目的:研究人髓核细胞(NPCs)来源外泌体在诱导人尿源干细胞(USCs)向髓核细胞分化中的作用,并对其生物学效应进行了探讨。方法:收集健康志愿者晨尿,离心法提取人尿源干细胞并培养。利用倒置显微镜观察细胞形态,利用流式细胞技术和三系诱导分化技术,对尿源干细胞的表面标记和分化性能进行了评估。通过腰椎椎间孔镜手术取得突出的髓核组织,消化后提取NPCs;采用超速离心从上清液中提取NPCs外泌体,并对其进行透射电镜观察、粒径分析检测及蛋白免疫印迹技术检测表面标志物。将PKH26染料标记NPCs外泌体与GFP慢病毒转染的P3代USCs共孵育12h,镜下观察USCs对NPCs外泌体的摄取情况。实验分三组:外泌体组,将USCs与NPCs外泌体共培养;共培养组,将USCs与NPCs Transwell小室培养;对照组,USCs单独培养。应用荧光定量PCR(q RT-PCR)技术检测三组USCs中髓核标志基因m RNA相对表达量,对诱导效果进行定量比较。同时应用CCK-8法检测三种处理措施对USCs增殖情况的影响。结果:实验提取的尿源干细胞成骨、成脂、成软骨诱导后均分化成功,并且流式细胞分析示标志物:CD29(99.57%)、CD44(97.46%)、CD73(97.71%)高表达,CD31(0.59%)、CD45(0.19%)低表达。实验提取的髓核细胞外泌体,透射电镜显示为50~100nm的扁圆形双膜结构,蛋白免疫印迹技术显示CD63、CD81、Tsg101蛋白表达呈阳性,不表达阴性蛋白Calnexin。荧光显微镜观察显示经PKH26红色染料标记NPCs外泌体出现在USCs经GFP绿色荧光转染的细胞质中,可证实USCs在体外可以摄取NPCs外泌体。CCK-8细胞增殖实验显示外泌体组USCs细胞增殖明显高于共培养组及对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。q RT-PCR检测发现外泌体组髓核标志基因(包括COL2A1、ACAN、HIF-1α、SOX-9)的m RNA表达量明显高于对照组及共培养组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:研究证明人髓核细胞外泌体可促使人尿源干细胞向类髓核细胞定向分化。外泌体诱导具有明显诱导作用及细胞增殖作用。
其他文献
目的:术后认知功能障碍是影响患者手术预后的重要因素之一,但针对性的研究尚少。宫腔镜作为实现子宫腔直接可视化,对可疑病变进行病理标本取样,即对子宫内膜息肉等疾病实现“即视即治”治疗的一种内镜诊疗技术,已在妇科疾病的诊疗方面广泛使用。目前针对宫腔镜麻醉主要使用丙泊酚,其心肺不良反应发生率高,对认知功能存在一定影响。苯磺酸瑞马唑仑作为一种新型苯二氮卓类药物,已在多种内镜麻醉中被证明效果不低于丙泊酚,且不
背景与目的:载脂蛋白E(apolipoprotein E,APOE)基因是阿尔兹海默病(Alzheimer’s disease,AD)最为著名的易感基因,已经有大量的研究证明了APOEε4等位基因可以影响非痴呆个体的大脑结构和功能。然而当评价APOE对神经系统的影响时,其他基因多态性往往被忽略。rs405509是一种新发现的与AD相关的单核苷酸多态性(singlenucleotide polymo
目的:重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)是临床上常见的急腹症,伴有持续48小时以上的器官功能衰竭,具有进展快,预后差的特点,目前认为SAP并发持续性多器官衰竭(persistent multiple organ failure,PMOF)是发生死亡的独立危险因素。系统免疫炎症指数(systemic immune inflammation index,SII
目的:分析不同转移路径对Ⅲ期高级别浆液性卵巢癌(High-Grade Serous Ovarian Cancer,HGSOC)预后的影响。方法:回顾性病例资料研究,统计2000-2020年期间就诊于青岛大学附属医院、符合纳入标准的Ⅲ期HGSOC患者。根据转移路径,将患者分为单纯淋巴结转移组与腹膜转移组(伴或不伴淋巴结转移组),采用卡方检验及Wilcoxon秩和检验分析患者临床病理特点、化疗敏感性、
目的:建立一种基于Taq Man探针的实时荧光定量检测方法,用于定量检测PER2(Period 2)基因启动子甲基化水平,并初步用于研究髓系白血病患者PER2甲基化水平以及与相关基因表达和细胞增殖、凋亡之间的关系,以期探索PER2基因甲基化在白血病发生发展中的作用。方法:(1)根据Gen Bank数据库检索到的PER2基因序列,选择出PER2基因启动子位置的Cp G序列富集区域。根据亚硫酸氢盐转化
目的:本研究通过对共患甲状腺乳头状癌(Papillary Thyroid Carcinoma,PTC)和乳腺癌(Breast Cancer,BC)女性患者的临床病理特征进行回顾性分析,探究女性PTC患者共患BC的相关因素,以期提高对多原发癌的认识并指导临床诊治。方法:(1)收集2010年9月至2020年9月在青岛大学附属医院手术治疗的428例女性PTC患者,上述患者均在我院经手术病理确诊为PTC,
目的通过检测乙肝相关肝癌患者外周血热休克转录因子1(heat shock transcriptionfactor 1,HSF1)、热休克蛋白27(heat shock protein 27,HSP27)及已广泛开展的外周血细胞计数,探讨其异常表达及联合检测对于乙肝相关肝癌分期及预后的临床参考价值。方法选择2013年10月-2015年10月住院首次确诊乙肝相关肝癌患者80例,作为肝癌组,同期住院首次
目的:制备出一种季铵化壳聚糖(quaternized chitosan,QCh)修饰的上转换纳米材料(upconversion nanoparticles,UCNP),并且搭载硅层(silica,SiO2)及光敏剂亚甲基蓝(methylene blue,MB),其纳米粒径小、水溶性好、光学性能稳定,可用作新型根管冲洗剂,经光动力治疗难治性根尖周炎。本研究对纳米粒子的理化性质进行了表征,验证了对粪肠
目的:多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)是一种复杂的血液系统恶性肿瘤,它的主要特征是浆细胞能够在骨髓中进行克隆增殖,导致大量恶性单克隆浆细胞堆积,其复发难治、易髓外侵犯的特点给患者及家属带来巨大的痛苦。本研究旨在探讨上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transformation,EMT)经典标志物在原代MM细胞中的表达情况并分析其与临床参数及患者预后的
目的:评价基于深度学习图像重建算法(deep learning image reconstruction,DLIR)相对于滤波反投影重建算法(filtered back projection,FBP)和基于多模型的自适应统计迭代重建算法(adaptive statistical iterative reconstruction-veo,ASIR-V),在腹部动态增强扫描中对胰腺、门静脉、肾脏及肾静