研究背景:脑出血（Intracerebral hemorrhage,ICH）是一种常见且具有高死亡率和致残率的脑血管疾病。相对于原发性脑损伤,继发性脑损伤（Secondarybrain injury,SBI）是影响脑出血死亡率和致残率更重要的因素。脑出血后血肿及其代谢产物是造成SBI并引起大量神经细胞损伤的重要因素。多种病理生理过程参与了 SBI,其中包括炎性细胞和因子浸润,神经元细胞凋亡和变性以及氧化应激介导的损伤。目前,探索ICH后炎症损伤的发生机制成为热门研究方向。SHP-2是一种细胞质酪氨酸磷酸酶,在脑组织中的神经元、小胶质细胞和星形胶质细胞中有不同程度的表达。SHP-2被磷酸化为P-SHP-2后激活其生物学活性。SHP-2与炎症反应密切相关,SHP-2及其磷酸化可通过调节腺嘌呤核苷酸转位酶1（ANT1）依赖的线粒体稳态来调控NLRP3炎性小体的激活,抑制炎症因子的释放,减轻炎症反应。第一部分探究SHP-2及P-SHP-2在大鼠脑出血后血肿周围脑组织中的蛋白水平及分布情况目的:研究大鼠ICH后脑组织中SHP-2及P-SHP-2蛋白水平变化及分布的情况。方法:随机选取健康成年雄性SD大鼠,将其分为以下几个组别:Sham组和ICH后6小时组,12小时组,24小时组和48小时组,每组随机分配12只大鼠,且一般情况基本一致,6只用于蛋白印迹试验,6只用于免疫荧光试验。通过向大鼠基底节区注射心脏自体血,并在各对应时间点将大鼠处死,灌注后提取基底节区脑组织。使用蛋白印迹试验（Western Blot）和免疫荧光染色（IF）检测SHP-2及P-SHP-2的蛋白水平变化,使用免疫荧光共染技术分析P-SHP-2的分布情况。结果:1、大鼠ICH后脑组织中P-SHP-2的蛋白水平于ICH 6h后开始上升并于ICH后24h到达最高值,约为sham组的2.5倍;在ICH 后 48小时出现下降趋势。2、大鼠ICH后P-SHP-2在神经元和小胶质细胞中均有表达,并随着ICH 后时间的推移蛋白水平逐步上升。结论:ICH诱导SHP-2及其磷酸化显著上升,并广泛存在于神经元及小胶质细胞中。第二部分:探究SHP-2过表达对脑出血后继发性脑损伤的影响目的:1、检测过表达SHP-2后,ICH后脑组织中P-SHP-2的水平。2、探究过表达SHP-2对大鼠ICH后SBI的影响。方法:随机选取健康成年雄性SD大鼠,将其分为以下几个组别:Sham组、ICH组、ICH+空载组（vector组）、ICH+SHP-2过表达质粒组（over-SHP-2组）,每组12只且一般情况基本一致。转染过表达SHP-2质粒24小时后建立ICH模型。大鼠在造模24小时后处死并提取基底节区脑组织。利用Western Blot检测P-SHP-2水平,利用免疫荧光共染检测小胶质细胞极化情况,利用TUNEL染色检测细胞死亡情况。结果:1、与Sham组相比,过表达SHP-2可以显著上调脑组织中P-SHP-2的水平。2、过表达SHP-2可以显著减少血肿周围促炎型小胶质细胞（M1型）数量,增加抗炎型小胶质细胞（M2型）数量。3、过表达SHP-2可以减少神经细胞的死亡。结论:外源性过表达SHP-2可以显著上调血肿周围P-SHP-2的水平,并改善血肿周围神经炎症和细胞死亡。第三部分 探究SHP-2过表达改善脑出血后继发性脑损伤的作用机制目的:观察外源性干扰ANTI对SHP-2过表达介导的神经保护作用的影响,探讨SHP-2改善ICH后SBI的可能机制方法:1、随机选取健康成年雄性SD大鼠,将其分为以下几个组别::Ctr组,NC siRNA 组,ANT1 siRNA1 组,ANT1 siRNA2 组,ANT1 siRNA3 组。每组 6 只,转染ANT1 siRNA后24h处死大鼠并提取基底节区脑组织,利用Western Blot分析脑组织中ANT1的蛋白水平。2、随机选取健康成年雄性SD大鼠,将其分配为以下4组:ICH+vector+NC siRNA 组、ICH+over-SHP-2+NC siRNA 组、ICH+vector+ANT1 siRNA 组、ICH+over-SHP-2+ANT1 siRNA 组,每组 6 只且一般情况基本一致。在转染SHP-2质粒及ANT1 siRNA后24小时后建立脑出血模型。大鼠在造模24小时后处死并提取脑组织,利用免疫荧光共染检测小胶质细胞极化情况以及利用TUNEL染色检测神经细胞死亡情况。结果:1、下调ANT1显著抑制SHP-2过表达介导的小胶质细胞抗炎表型分化。2、下调ANT1显著抑制SHP-2过表达介导的减少神经细胞死亡。结论:SHP-2以ANT1依赖的方式改善ICH后炎症反应和细胞死亡。