目的:建立H2O2诱导PC12细胞损伤的模型,观察自噬抑制剂3-MA干预对细胞凋亡的影响,并探讨其可能存在的作用机制。方法:(1)MTT法、细胞培养液上清LDH活力测定、Hoechst33342染色检测细胞凋亡;(2)罗丹明123测定线粒体膜电位;(3)细胞内活性氧,脂质过氧化物,超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性检测;(4)单丹(磺)酰戊二胺染色观察细胞自噬情况;(5)蛋白印迹实验分析细胞内 NF-E2-related factor(Nrf2)表达水平,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值的变化。结果:第一部分:MTT结果表明,双氧水对PC12细胞有损伤作用,并且当 H2O2浓度为 200μmol/L,400μmol/L,800μmol/L 时,随着双氧水浓度增加,细胞相对存活率显著降低,并呈现明显的浓度依赖性;细胞培养液上清LDH活性检测和Hoechst33342染色结果进一步表明H2O2诱导细胞发生了凋亡;双氧水诱导PC12细胞MPP下降;第二部分:不同浓度的双氧水可增加细胞内活性氧、脂质过氧化物含量,并使细胞内的抗氧化酶活性明显下降,细胞内Nrf2水平降低;第三部分:单丹(磺)酰戊二胺(MDC)染色结果表明H2O2组MDC点状结构明显增加,且24h比12h组明显;Western blot结果显示400μmol/L的H2O2损伤24h时后,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的值显著增加。第四部分:用自噬抑制剂3-MA干预400μmol/LH2O2损伤的细胞,细胞凋亡比例升高,MPP降低,细胞内ROS,MDA量增加。3-MA的使用还使细细胞内抗氧化酶SOD,CAT活性明显减弱,Nrf2水平降低。结论:双氧水诱导细胞发生凋亡,3-MA抑制自噬对双氧水引起的细胞凋亡具有促进作用,其作用机制可能与细胞内Nrf2水平有关。