研究目标:肝内胆管癌（Intrahepatic Cholangiocarcinoma,ICC）是人类致命的高度恶性肿瘤之一,发病率和死亡率逐年增加。目前,ICC发生发展的分子机制尚不完全清楚,且治疗手段有限。因此,研究ICC发生的分子机制并开发靶向药物是十分必要的。Notch1在约80%的ICC患者中高表达,但其驱动ICC发生的分子机制尚不十分清楚。同时,ICC与肝细胞肝癌（Hepatocellular Carcinoma,HCC）相比的一个重要的特点是没有脂肪积累。我们推测Notch1可能抑制了脂肪合成进而驱动了ICC的发生。因此,本研究旨在通过肝癌细胞系和小鼠肿瘤模型来阐明Notch1对ICC中脂肪酸从头合成（de novo lipogenesis）途径的影响及驱动ICC发生的分子机制。研究方法:首先,通过高压尾静脉转染技术构建AKT/Notch1胞内片段（Notch1 Intracellular Domain,NICD）诱导的ICC和AKT/Ras诱导的HCC小鼠模型。然后,以正常小鼠为对照,运用Western blotting检测ICC和HCC中AKT/mTOR介导的脂肪酸从头合成途径中各蛋白的表达情况。并在ICC细胞系中验证Notch1对脂肪酸合酶（Fatty Acid Synthase,FASN）的抑制作用。接着,通过转录组测序技术,对AKT/Ras和AKT/NICD模型、正常小鼠进行肝脏样本测序;在体外,以原代ICC肿瘤细胞（简称A/N）为研究对象,对沉默Rbpj前后的两组细胞进行测序。根据测序结果筛选得到Notch1的靶点Elf3。接下来分别在GEPIA（Gene Expression Profiling Interactive Analysis）数据库中分析Elf3在临床ICC以及HCC中的mRNA表达水平,免疫组化检测人ICC组织样本Elf3的蛋白表达水平。Western blotting验证Notch1对Elf3、FASN以及Elf3对FASN的调控关系。最后,为了研究Elf3的功能,通过EdU以及平板克隆实验验证Elf3对ICC细胞增殖能力的影响。接着,在体内通过高压尾静脉转染技术同时过表达AKT和Elf3,以单独过表达AKT作为对照组,通过Western blotting和qRT-PCR、免疫组化来验证Elf3能否作为致癌基因诱导ICC的发生。研究结果:本研究发现,与HCC相比,ICC的脂肪酸合酶FASN的表达被显著抑制;AKT/mTOR介导的内源性脂肪酸合成途径被关闭;油红O结果也显示在ICC中没有脂滴积累。体外实验证明沉默Notch1可以上调FASN的表达。进一步地,根据转录组测序结果筛选到Notch1在ICC中的靶基因Elf3。对人ICC组织样本进行免疫组化染色发现Elf3和Notch1在ICC中高表达,FASN低表达。与GEPIA数据库中的结果一致,Notch1与Elf3的表达正相关,与FASN负相关。进一步的体外实验证明,沉默Elf3上调FASN的表达,并且在沉默了Elf3的ICC细胞中过表达Notch1并不能抑制FASN的上调,说明Notch1对FASN的调控依赖Elf3。最后,本研究证明Elf3可以促进ICC细胞的增殖。体内实验证明,Elf3在3个月后可以作为原癌基因与AKT共同诱导ICC的发生,其肿瘤组织的表型与经典的ICC相似,肿瘤空泡里有淤积的胆汁,HE染色可以发现癌巢形状为腺管状,免疫组化染色的结果表明CK19阳性。研究结论:与HCC相反,由AKT/mTOR介导的脂肪酸从头合成途径在ICC中被抑制。Notch1在ICC中通过Elf3抑制了FASN的表达,从而抑制脂肪酸从头合成。Elf3的表达在ICC中显著上调,并能够作为原癌基因与AKT共同驱动ICC的发生。以上结果表明,Elf3对ICC的发生发展具有重要的促进作用,具有成为治疗ICC新靶点的潜力。