基于二维红外光谱技术及抗肿瘤活性的陈皮质量评价研究

来源 :甘肃中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hyslst
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目的:陈皮具有理气健脾,燥湿化痰的功效。现代药理研究表明,其在抗氧化,抗肿瘤等方面也发挥一定作用。陈皮以广陈皮为道地,以新会为核心道地产区。在陈皮产业发展中,存在着掺假售假频现,以次充好等诸多问题。本实验建立13批不同产区、不同储存年限陈皮二维相关红外光谱分析方法;测定13批不同产区、不同储存年限陈皮中水分、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素含量,检测陈皮对A549肺癌细胞活力及细胞凋亡的影响,旨在从化学评价及药效水平两个层面,为陈皮的鉴别和质量控制提供新的思路方法,为陈皮抗肿瘤药理活性研究提供实验依据。方法:1.二维相关红外光谱分析:压片法制备样品,采用傅里叶变换红外光谱法,采集13批陈皮在30~120℃范围内的红外光谱。运用红外光谱、二阶导数光谱和二维相关红外光谱,建立13批不同产区、不同储存年限陈皮二维相关红外光谱分析方法。2.含量测定:依照2020版《中国药典》HPLC法检测13批不同产区、不同储存年限陈皮中橙皮苷、川陈皮素、橘皮素含量,并对比分析。3.在药效水平上评价陈皮质量:采用cck-8法检测13批不同产区、不同储存年限陈皮对A549肺癌细胞活力的影响。以A549肺癌细胞为模型,配制各批次陈皮0,10,20,30,50,60,80,100 mg·m L-1生药浓度范围的含药培养基,以IC50为指标进行对比分析,评价不同产区、不同储存年限陈皮质量。采用Annexin V-FITC/PI双染法、流式细胞术检测陈皮对A549肺癌细胞凋亡的影响。结果:1.二维相关红外光谱分析实验结果:不同产区、不同储存年限陈皮在相应波段内峰的强度、位置、个数不同,可作为陈皮鉴别的依据。1700~1396 cm-1波段内的二维相关红外光谱表明,两广产区陈皮含有4-5个自动峰,2018湖南陈皮的二维谱图在直观上与广陈皮有明显区别,2019浙江、2018湖北陈皮二维图谱与广陈皮较为相似。1150~996 cm-1波段内的二维相关红外光谱表明,两广产区陈皮谱图相似,均形成明显的4×4矩阵,2018湖南、2018湖北陈皮谱图较为相似,且最强峰均在1092 cm-1处,2020四川、2020湖北陈皮图谱在直观上与两广产区陈皮有明显区别。2.化学方法评价陈皮质量实验结果:13批陈皮水分、橙皮苷、川陈皮素、橘皮素含量均符合药典规定。广陈皮中,三种成分含量最高的均为2020年开平产区陈皮。与非两广产区陈皮相比,两广产区陈皮的橙皮苷含量普遍较低。3.在药效水平上评价陈皮质量实验结果:从体外抗肿瘤药效活性来看,2018湖北、2018湖南、2020双水、2017广西、2010天马陈皮对A549肺癌细胞抑制作用最强,2015梅江、2015天马、2020四川、2018双水对A549肺癌细胞抑制作用次之,2020开平、2019双水、2019浙江、2020湖北对A549肺癌细胞抑制作用最弱。结论:二维相关红外光谱基于整体性直接对药材粉末进行检测,无需复杂的样品前处理手段,具有简单、快速、无损的优势,可以为陈皮的品质评价、鉴别、质量控制提供依据,是一种快速有效的方法。中药质量评价应建立含量测定及药效评价相结合的模式。
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