外泌体促进鸡骨髓源树突状细胞抗NDV活性研究

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外泌体是细胞分泌的大小均一的微小囊泡状小体,具有脂质双分子层结构。研究表明,有些病毒可以利用外泌体在宿主靶细胞之间自由穿梭和准确定位的特点,将病毒致病相关蛋白、基因组甚至毒粒转运到全身各处,导致免疫功能失调,造成病毒扩散及产生免疫耐受等现象。目前NDV相关外泌体在NDV引起的天然免疫反应中的发挥作用尚属未知。因此本研究以外泌体及鸡源树突状细胞为研究对象,探究细胞感染NDV后分泌的外泌体如何通过调控鸡源树突状细胞影响机体抗NDV感染。树突状细胞(dendritic cells,DCs)是介导天然免疫应答的重要一环,本研究通过真核表达相关鸡源细胞因子、优化培养条件等方法构建了一种有效培养鸡骨髓源树突状细胞(chicken bone marrow dendritic cells,ch BMDCs)的方法,即本研究最终有效优化了ch BMDCs的分离培养条件,即使用Histopaque?-1119分离液,4周龄SPF(白来航)鸡,经灭活处理的Gibico血清,商品化的ch IL-4和ch GM-CSF培养6天。所得细胞具有典型树突状细胞形态,经流式细胞术(KUL01-MHCII+)检测其纯度在73%左右。经NDV NA-1毒株刺激后,该ch BMDCs表面标志物MHCII表达量显著增加,CCR7、CD80等DC成熟相关表面标志物的转录水平也显著上升,说明我们获得了纯度较高的未成熟ch BMDCs。随后本研究初步探索了NDV Ex在对ch BMDCs抗病毒能力的影响,结果显示,NDV Ex刺激会显著促进ch BMDCs的成熟,抑制病毒增殖,进而通过抑制剂处理实验,我们初步发现NDV Ex可以通过TLR4信号通路刺激ch BMDCs的活化。综上所述,本研究建立了一种鸡骨髓源树突状细胞体外诱导培养方法,成功分离得到鸡源树突状细胞ch BMDCs,并且发现NDV Ex可以通过TLR4信号通路介导的ch BMDCs活化,进而抑制NDV复制。
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